EPHA5 调控非小细胞肺癌干性及吉非替尼敏感性的研究成果

为解决肺癌治疗难题，研究人员探究 EPHA5 在 NSCLC 中的作用，发现其影响细胞干性及吉非替尼敏感性。

　　肺癌是全球和中国癌症相关死亡的主要原因。据 2019 年国家癌症中心数据，肺癌在中国新发病例达 78.7 万，发病率为 57.26/10 万，在男性中最为常见，在女性中位居第二。肺癌死亡率居高不下的主要原因是癌细胞的增殖和转移。虽然靶向治疗取得了显著进展，例如吉非替尼（gefitinib）等表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂（EGFR-TKIs）的出现，显著改善了患者的预后，延长了无进展生存期，但 EGFR 突变患者在治疗 8 - 16 个月后仍会出现疾病进展，因此迫切需要进一步研究 EGFR-TKI 的耐药机制。

此前研究发现，非小细胞肺癌（NSCLC）对吉非替尼的耐药性与癌症干细胞（CSC）特性增强有关，降低 NSCLC 中的 CSC 可能是解决吉非替尼耐药性的潜在策略。CSC 具有静止、上皮 - 间质转化（EMT）和抵抗 DNA 损伤诱导的细胞凋亡等特性，对肿瘤耐药性有重要贡献。醛脱氢酶（ALDH）作为 CSC 的生物标志物，与癌细胞增殖、转移、多药耐药（MDR）和抗氧化应激有关。此外，CSC 还通过 ATP 结合盒转运体（ABC transporter）导致多药耐药，肿瘤干细胞标记物 OCT4 可调节多个 ABC 蛋白基因，表明 CSC 参与了耐药过程。

EPHA5 是受体酪氨酸激酶家族的重要成员，在多种癌症中发挥着复杂的作用。在 NSCLC 中，其表达与患者预后和放疗敏感性有关。Eph 受体可调节 CSC 功能，鉴于 CSC 对治疗干预的耐药性，靶向 Eph 受体可能为治疗耐药性癌症带来希望。基于此，研究人员开展了本次研究，以探究 EPHA5 通过调节 Wnt 信号通路在增强 NSCLC 细胞干性和吉非替尼耐药性中的作用。该研究成果发表在《Advances in Cancer Biology - Metastasis》上。

研究人员采用了多种关键技术方法。细胞实验方面，利用细胞计数试剂盒 - 8（CCK - 8）检测细胞活力，评估吉非替尼和 CHIR - 99021 的细胞毒性；通过 RNA 干扰（RNAi）技术合成 EPHA5 siRNA，转染 H460 和 H1229 细胞，敲低 EPHA5 表达；运用定量 qRT - PCR 分析和蛋白质免疫印迹（Western blot）分别检测基因和蛋白表达水平。此外，还使用流式细胞术分析 CD133 阳性细胞比例和细胞周期；对患者肺癌组织进行免疫组化染色，检测 EPHA5 蛋白表达。

研究结果如下：

1. EPHA5 表达与临床病理参数的关系：在 93 例肺腺癌患者中，EPHA5 基因高表达的有 54 例（58.1%）。根据 EPHA5 基因表达水平分为高表达组和低表达组，两组在性别、年龄和肿瘤大小方面无显著差异，但在淋巴结转移和 EGFR 突变方面存在显著差异。
2. EPHA5 对 NSCLC 细胞 CSC 表型和吉非替尼敏感性的影响：研究人员成功建立了 EPHA5 敲低的 NSCLC 细胞系，CCK - 8 检测显示，EPHA5 敲低细胞的半数抑制浓度（IC50）明显低于亲本细胞，表明敲低 EPHA5 可增强 NSCLC 细胞对吉非替尼的敏感性。同时，与对照组相比，EPHA5 敲低组的 CD133 阳性细胞比例降低，多能性标记物 SOX2、Nanog、KLF4 和 Oct4 的表达也不同程度下降，说明 EPHA5 在 NSCLC 的 CSC 调控中起关键作用。
3. Wnt/β - catenin 信号通路的作用：异常的 Wnt/β - catenin 信号通路促进癌症干细胞更新和细胞增殖，在耐药中起关键作用。Western blot 分析表明，EPHA5 敲低后，p - β - catenin/β - catenin 比值显著增加。使用 Wnt 激活剂 CHIR - 99021 激活 Wnt/β - catenin 信号通路后发现，2.5 和 5 μM 的 CHIR - 99021 无药物毒性，但 5 μM CHIR - 99021 可增加 β - catenin 表达，显著降低 siEPHA5 组对吉非替尼的敏感性。此外，Wnt 激活剂还逆转了 EPHA5 敲低对 CD133 阳性细胞比例的抑制作用，SOX2、Nanog、KLF4 和 OCT4 的表达变化也与之相符，进一步证实 Wnt/β - catenin 是 EPHA5 信号通路的重要效应因子。

研究结论与讨论：NSCLC 是一种恶性程度高、预后差的肿瘤，EGFR - TKIs 耐药是临床治疗的重大挑战。本研究表明，EPHA5 通过 Wnt 信号通路参与癌细胞干性和吉非替尼敏感性的调控。高表达的 EPHA5 虽与肿瘤增殖增加相关，但却意外地与患者较长生存期有关，其作用较为复杂。EPHA5 敲低可增强吉非替尼敏感性，Wnt/β - catenin 信号通路是 EPHA5 调控肺癌细胞干性和吉非替尼敏感性的关键途径。该研究为深入了解 NSCLC 的发病机制和治疗耐药性提供了新的视角，为开发针对 EPHA5 的临床治疗策略奠定了理论基础，但 EPHA5 在临床应用中的进一步开发仍需更多研究。