皮肤利什曼病会引发印度次大陆黑热病卷土重来？—— 尼泊尔的基因组学洞察

为探究皮肤利什曼病（CL）对黑热病（VL）消除计划的影响，尼泊尔 B. P. Koirala 健康科学研究所研究人员对 CL 患者的利什曼原虫进行分子特征分析，发现 CL 和 VL 可能由相似的杜氏利什曼原虫（L. donovani）菌株引起，这对 VL 消除计划意义重大。

　　在尼泊尔，曾经黑热病（Visceral leishmaniasis，VL）是利什曼原虫感染的主要临床形式，它由杜氏利什曼原虫（Leishmania donovani）引起。自 2005 年参与区域黑热病消除计划以来，尼泊尔的黑热病病例数大幅下降，如今每年仅有约 250 例。然而近年来，情况发生了变化，黑热病病例从东部的传统低地疫区向西部和远西部的山区转移。与此同时，皮肤利什曼病（Cutaneous leishmaniasis，CL）在尼泊尔悄然出现，而且多数患者集中在西部省份，这些患者还都没有出国旅行史。

此前的研究在这些 CL 患者的皮肤样本中检测出了杜氏利什曼原虫或硕大利什曼原虫。这一发现引发了科学界的担忧，如果感染杜氏利什曼原虫的 CL 患者不仅会传播 CL，还能引发 VL，那么这对于正处在攻坚阶段的 VL 消除计划来说，无疑是一个巨大的挑战。目前，虽然知道 CL 和 VL 都可能由杜氏利什曼原虫引起，但尚不清楚这两种病症所涉及的杜氏利什曼原虫在亚种水平的基因组差异，以及这种差异是否会导致不同的疾病表现。因此，研究 CL 和 VL 之间的潜在联系，明确 CL 是否会成为 VL 的潜在传染源，对维持印度次大陆 VL 消除计划的成果至关重要。

为了解开这些谜团，来自尼泊尔 B. P. Koirala 健康科学研究所等多个机构，以及比利时热带医学研究所的研究人员展开了一项深入研究。他们的研究成果为我们理解 CL 和 VL 之间的关系提供了重要线索，研究发表于《BMC Infectious Diseases》杂志。

研究人员为开展这项研究，主要运用了以下几种关键技术方法：首先是样本采集，根据 2018 - 2023 年 6 月尼泊尔卫生和人口部流行病学与疾病控制司的 CL 病例信息，结合与皮肤科医生的交流，确定了两个 CL 病例数最多的省份。在这些省份中，从 2023 年 7 月到 2024 年 7 月，研究人员从 7 个不同的皮肤病监测点，采集了 45 例临床疑似 CL 患者的皮肤打孔活检样本（1×3 mm），同时记录患者的临床信息、居住城市和旅行史。其次是 DNA 提取，使用 Quick - DNA Miniprep Plus Kit 从整个活检样本中提取 DNA，并进行后续检测。最后是 rDNA PCR 和序列分析，通过 rDNA - SSU（18 S - rRNA 基因）PCR 确认样本是否感染利什曼原虫，阳性样本再进行 rRNA 基因阵列的内部转录间隔区 1（rDNA - ITS1）PCR 以确定感染物种，之后对 PCR 产物进行 Sanger 测序，并与多种参考序列进行比对分析 。

研究结果如下：

1. 寄生虫检测与鉴定：在 30 个样本中检测到利什曼原虫 DNA，其中 26 个样本成功测定了 rDNA - ITS1 序列。所有这些序列完全相同，通过与大量已有的杜氏利什曼原虫序列对比发现，这些序列与尼泊尔、印度和不丹之前报道的来自 CL 和 VL 患者的杜氏利什曼原虫序列一致。这表明此次研究中的 26 例 CL 患者感染的利什曼原虫均为杜氏利什曼原虫。
2. 患者信息分析：研究人员还分析了患者的居住和旅行信息。参与研究的患者大多居住在卡纳利省（Karnali）或苏都尔帕希姆省（Sudur Pashchim），部分病例在苏都尔帕希姆省的拜塔迪（Baitadi）和巴朱拉（Bajura）地区呈现聚集性。在有旅行史记录的 19 例患者中，只有 6 例在首次出现病变前两年内有过跨地区旅行经历，其中 2 例出国，4 例在国内不同省份旅行 。

在研究结论和讨论部分，此次研究进一步证实了杜氏利什曼原虫可导致尼泊尔的 CL 病例，而且 26 例 CL 患者的 rDNA - ITS1 序列与之前报道的 7 例 CL 患者以及印度次大陆 4 例 VL 患者体内的杜氏利什曼原虫序列相同。这强烈暗示，这些引起 CL 和 VL 的杜氏利什曼原虫可能密切相关，甚至是相同的菌株。如果后续研究进一步证实这一点，那么 CL 患者很可能成为 VL 的传染源，这将对尼泊尔的 VL 消除计划产生重大影响，意味着需要重新调整疾病控制策略。

不过，这项研究也存在一定的局限性。研究仅对寄生虫基因组的 rDNA - ITS1 区域进行了测序，无法确定其他未测序的基因组区域是否存在差异。而且，几乎所有样本都来自尼泊尔西部，其他地区的 CL 病例可能由不同的杜氏利什曼原虫变种或其他物种引起。尽管如此，这并不影响当前研究在揭示 CL 和 VL 潜在联系方面的重要意义。

随着印度次大陆接近消除 VL 这一公共卫生目标，明确 CL 对 VL 持续存在的潜在影响已成为公共卫生领域的重点工作。如果后续研究能确认 CL 患者是 VL 的传染源，那么就需要调整针对 VL 和 CL 的疾病控制干预措施，以应对这一动态变化的新现实。这项研究为进一步探索 CL 和 VL 的关系奠定了基础，也为相关疾病的防控提供了重要参考 。