工程化CD8+T细胞：基于合成Notch受体平台的双功能免疫疗法协同抗HIV体液与细胞免疫反应

《mBio》：Engineering of CD8+ T cells with an HIV-specific synthetic notch receptor to secrete broadly therapeutic antibodies for combining antiviral humoral and cellular immune responses

本文创新性地构建了靶向HIV-1包膜蛋白（Env）的合成Notch受体（synNotch）CD4-17b-VN系统，通过抗原诱导方式调控广谱中和抗体（bNAb）VRC01和双特异性T细胞衔接蛋白（BiTE）N6-αCD3的分泌。该研究首次实现CD8+T细胞对游离病毒颗粒和潜伏感染细胞的双重识别，在体外模型中证实其可长效抑制病毒复制并特异性清除潜伏再激活细胞，为艾滋病功能性治愈提供了新型联合免疫治疗策略。

　　

工程化T细胞的抗HIV革命：合成生物学开启免疫治疗新范式

构建靶向HIV的智能识别系统
研究团队创新性地将CD4分子D1D2结构域与17b抗体单链可变区（scFv）融合，构建出双特异性识别分子CD4-17b作为synNotch受体的胞外域。该系统展现出独特的双模态激活特性：不仅能识别细胞表面表达的Env蛋白，还能直接感应HIV-1病毒颗粒。实验数据显示，在293T细胞模型中，病毒颗粒刺激可使蓝色荧光蛋白（BFP）表达量呈现剂量依赖性增长，当与Env⁺靶细胞共刺激时，BFP阳性细胞比例可达54.1%。

双功能输出模块的精准调控
通过将响应元件中的报告基因替换为治疗分子，团队开发出三组工程化T细胞：分泌VRC01的单功能组、分泌N6-αCD3的单功能组以及同时分泌两者的双功能组（VN）。值得注意的是，VN组在Jurkat细胞中展现出卓越的性能，其VRC01分泌量在72小时达到约200ng/mL，且对包括MW965、SF162等不同亚型HIV-1假病毒的中和效果显著优于单功能组（P<0.01）。这种协同效应可能源于BiTE分子对CD3⁺T细胞的募集作用，流式细胞术检测到CD62L下调和CD25上调的典型激活标志。

"远程狙击"式的细胞杀伤机制
研究揭示了N6-αCD3介导的独特杀伤模式：工程化T细胞分泌的BiTE可桥接CD8⁺T细胞与靶细胞，形成免疫突触。在共培养实验中，这种旁分泌杀伤效应可清除70%的293T-gp160细胞和50%的HXB2感染H9细胞。针对潜伏感染模型ACH-2细胞，经PMA激活后，双功能组可特异性清除约20%的靶细胞。更令人振奋的是，在原代CD4⁺T细胞建立的潜伏感染模型中，CD4-17b-VN CD8⁺T细胞对再激活细胞（JQ1处理组）的清除率高达40%，且流式检测证实其特异性针对p24⁺细胞群。

安全性与持久性的双重保障
研究特别验证了CD4-17b受体的安全性：在U937等高CD4表达细胞中，该受体不仅未增加HIV-1感染风险，反而表现出竞争性抑制效应（P<0.05）。此外，双功能CD8⁺T细胞在长达7天的共培养中，使病毒p24水平持续低于检测下限，且细胞增殖未受影响，提示其具有持久抗病毒潜力。

这项研究开创性地将合成生物学与免疫治疗相结合，其模块化设计允许未来替换不同bNAb或组合多特异性抗体。虽然目前尚未开展体内实验，但该平台展现的抗原响应性、双模态杀伤和长效抑制特性，为开发"休克-杀伤"（shock and kill）策略提供了全新工具，有望突破当前艾滋病治疗中病毒潜伏库清除的瓶颈。