探秘驴排卵前卵泡液：抗氧化奥秘与精子保护的神奇力量

为解决驴卵泡液（FF）相关研究不足及对精子影响不明等问题，巴塞罗那自治大学研究人员研究驴 PFF 对精子的作用。结果发现 PFF 可保护精子免受氧化应激。该研究对优化驴 ART 及改进培养基配方意义重大，推荐一读。

　　

在动物的繁衍过程中，卵泡液（FF）可是个 “大忙人”，它的作用至关重要。卵泡作为卵巢的基本结构和功能单位，在其成长为窦卵泡的过程中，卵泡液会填充到卵泡腔里。这卵泡液就像是一个 “全能助手”，不仅能为卵泡成熟提供理想的微环境，给卵母细胞发育输送必需的营养，还能助力体细胞和生殖细胞之间的沟通，保护卵泡细胞免受氧化损伤，在排卵时促进卵母细胞排出。而且，卵泡液里的成分，像类固醇激素、多糖、蛋白质、活性氧（ROS）、代谢物和抗氧化剂等，会影响卵母细胞质量、早期胚胎发育和妊娠结局呢。所以，人们还会用卵泡液来补充体外成熟（IVM）培养基，帮助卵母细胞成熟和胚胎发育。

不过，这里面也有不少麻烦事儿。卵母细胞的发育和质量跟氧化应激（OS）关系密切，过多的 ROS 会对卵母细胞发育不利，降低生育能力。所以，维持卵泡液中氧化剂和抗氧化剂的平衡对辅助生殖技术（ARTs）的效果特别关键。另外，排卵后卵泡液会进入输卵管，和精子接触，它能维持精子的正常功能，保护精子的染色质完整性，减少 ROS 和氧化应激对精子 DNA 的损伤。可在驴子身上，交配后子宫内膜会有强烈的生理反应，中性粒细胞大量迁移，产生大量 ROS。虽然精液中的精浆能控制这些 ROS，但精子到达输卵管后，卵泡液在控制精子 ROS 方面到底起多大作用还不清楚。而且，不同物种的卵泡液成分不一样，目前对驴卵泡液中氧化还原生物标志物的研究也很少。所以，为了搞清楚这些问题，来自巴塞罗那自治大学的研究人员在《Scientific Reports》期刊上发表了题为 “Preovulatory follicular fluid protects donkey sperm from oxidative stress and modulates sperm function” 的论文。他们发现驴的排卵前卵泡液（PFF）能降低精子细胞内的 ROS 水平，更好地维持精子活力，而且驴 PFF 中氧化还原生物标志物的活性水平和其他物种比差异很大，可能具有物种特异性。这一研究成果为优化驴的辅助生殖技术提供了重要信息，也有助于改进其他物种体外卵母细胞成熟和受精培养基的配方。

为了开展这项研究，研究人员采用了多种技术方法。在样本采集方面，他们从 5 头不同的加泰罗尼亚母驴的 10 个排卵前卵泡中获取卵泡液样本，从 3 头加泰罗尼亚公驴采集 9 份精液样本。在实验设计上，分为两个实验。实验 1 用来评估 PFF 的氧化还原状态，实验 2 评估 PFF 对驴精子质量参数和 ROS 控制的影响。在分析检测上，利用商业试剂盒和特定方法检测 PFF 中抗氧化剂（包括酶促和非酶促抗氧化剂）和氧化剂的活性水平，使用计算机辅助精液分析（CASA）系统评估精子活力，借助流式细胞仪分析精子膜完整性、线粒体膜电位以及细胞内 ROS 水平等指标。

下面来看看具体的研究结果。

酶促和非酶促抗氧化剂在驴 PFF 中的情况

研究人员对驴 PFF 中酶促抗氧化剂（如超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GPX）和对氧磷酶 1（PON - 1））和非酶促抗氧化剂（总硫醇、铜离子还原抗氧化能力（CUPRAC）、血浆铁还原能力（FRAP）和 Trolox 等效抗氧化能力（TEAC））的活性水平进行了检测。不过具体数据在论文中的表格里展示啦。

驴 PFF 的氧化状态

研究人员还检测了驴 PFF 中总氧化状态（TOS）、过氧化物活性（POX - Act）、活性氧代谢物衍生物（d - ROMs）、晚期氧化蛋白产物（AOPP）和氧化应激指数（OSI）这些氧化生物标志物的水平，相关数据同样在论文表格里呈现。

驴精子与 PFF 孵育可提高其活力

研究人员把驴精子分别放在添加 20% PFF 的 Tris 缓冲培养基（TBM + FF）和普通 TBM 培养基中孵育。结果发现，孵育 60 分钟和 120 分钟后，TBM + FF 组的总活动精子百分比和渐进活动精子百分比都比 TBM 组高很多呢。而且，孵育 120 分钟后，TBM + FF 组精子的直线速度（VCL）、曲线速度（VSL）、平均路径速度（VAP）和摆动性（WOB）也显著增加。这说明 PFF 能提高驴精子的活力。

驴精子与 PFF 孵育能更好地保持其活力

经过 120 分钟孵育后，研究人员发现 TBM + FF 组中质膜完整（SYBR14?/PI?，即有活力）的精子百分比明显高于 TBM 组。这表明 PFF 有助于保持驴精子的活力。

驴精子与 PFF 孵育可降低细胞内 ROS 水平

研究人员还发现，孵育 120 分钟后，TBM + FF 组精子的细胞内总 ROS 水平显著降低；孵育 60 分钟和 120 分钟后，细胞内超氧阴离子（O??）水平也明显降低。这说明 PFF 能减少驴精子细胞内的 ROS 水平。

PFF 对驴精子线粒体活性没有影响

研究人员通过检测发现，在不同孵育时间下，TBM + FF 组和 TBM 组精子的线粒体膜电位没有显著差异。这意味着 PFF 不会影响驴精子的线粒体活性。

综合研究结果和讨论部分来看，这次研究意义非凡。它首次详细描述了驴 PFF 中氧化还原生物标志物的水平，包括酶促和非酶促抗氧化剂以及氧化生物标志物。和其他物种相比，这些生物标志物的活性水平差异很大，这强烈暗示它们可能具有物种特异性。而且，研究还发现驴精子接触 PFF 后，细胞内 ROS 水平降低，活力更好，这就表明在输卵管环境中，PFF 能保护精子免受氧化应激。这一发现对优化驴的辅助生殖技术意义重大，让人们更了解 PFF 成分的重要性。此外，对驴 PFF 中氧化还原生物标志物的描述，尤其是抗氧化剂，能为改进其他物种体外卵母细胞成熟和受精培养基的配方提供参考。所以说，这项研究为动物繁殖领域打开了新的大门，让人们对卵泡液和精子之间的关系有了更深的认识，也为未来的研究和实践提供了重要的方向。