0.01% 亚甲基蓝光动力疗法对抗牙本质粪肠球菌生物膜：开启根管消毒新希望？

为解决根管治疗中细菌难以彻底清除的问题，郑州大学第一附属医院的研究人员开展 aPDT 对牛和人牙本质中E. faecalis生物膜杀菌效果的研究。结果显示 aPDT 可杀菌，年轻生物膜更易被杀灭。该研究为根管消毒提供新思路，值得一读。

　　

在口腔医学的世界里，牙髓和根尖周疾病一直是困扰医生和患者的难题。你知道吗？这些疾病的主要 “元凶” 其实是细菌感染。想象一下，在我们的牙齿根管里，细菌就像一群 “小怪兽”，在那里安营扎寨，不断搞破坏。而在根管治疗中，医生们常用的机械和化学准备方法，就像是拿着 “常规武器” 去对抗这些 “小怪兽”，但却很难将它们彻底消灭。

这里面有一种叫粪肠球菌（Enterococcus faecalis，简称E. faecalis ）的细菌，它可是个 “厉害角色”。它是一种革兰氏阳性、兼性厌氧球菌，常常在那些做过根管充填却仍有根尖周病变的牙齿里被发现。而且，它特别 “狡猾”，能附着在牙本质上，钻进牙本质小管，还会形成生物膜，就像给自己穿上了一层 “防护铠甲”，让普通的消毒方法很难对付它。

那怎么办呢？这时候，抗菌光动力疗法（antibacterial photodynamic therapy，aPDT）出现了，它就像是一种新的 “秘密武器”。这种疗法是利用特定波长的可见光激活光敏剂，在氧气的存在下产生活性氧物种（reactive oxygen species，ROS），这些 ROS 就像 “小炸弹” 一样，能够破坏细菌的细胞膜、核酸和蛋白质，从而杀死细菌。但是呢，之前虽然有一些关于 aPDT 的研究，但还没有针对年轻和成熟的E. faecalis生物膜，在长期暴露的情况下，用共聚焦激光扫描显微镜（confocal laser scanning microscopy，CLSM）来评估其杀菌效果的详细研究。

为了探索这个问题，郑州大学第一附属医院口腔医学中心的研究人员进行了深入研究，并在《BMC Oral Health》期刊上发表了题为 “Antibacterial photodynamic therapy with 0.01% methylene blue against Enterococcus faecalis biofilms in dentin: a confocal laser scanning microscopy study” 的论文。这项研究就像是一场 “探索之旅”，研究人员试图找到 aPDT 对E. faecalis生物膜的杀菌奥秘。

研究人员在这场 “探索之旅” 中，用到了几个关键的 “工具” 技术方法。首先是扫描电子显微镜（scanning electron microscopy，SEM），它就像一个 “超级放大镜”，可以帮助研究人员观察牙本质的表面结构以及生物膜的生长情况。还有 CLSM，它能结合特殊的染色技术，让研究人员看到细菌生物膜的结构、空间分布，以及细菌的活力特征，就像是给细菌 “拍 X 光片”，把它们的情况看得清清楚楚。另外，研究人员还通过培养E. faecalis生物膜，设置不同的消毒处理组，来对比不同处理方法的杀菌效果。

下面我们来看看研究的结果。在 “SEM images of E. faecalis biofilms on dentin blocks” 这部分，研究人员先用 SEM 观察无菌牛牙本质块，发现表面很干净，没有微生物和碎片附着，牙本质小管也清晰可见。但是，当E. faecalis在上面生长后，情况就不一样啦！SEM 图像显示，牛牙本质表面和牙本质小管开口处甚至小管里面，都有大量的细菌细胞。而且，3 周龄的生物膜比 1 周龄的生物膜感染更严重，细菌细胞聚集得更多。这就好比 1 周龄的 “细菌小部队” 还在 “初级阶段”，而 3 周龄的已经发展成了 “大部队”，更难对付了。

接着是 “CLSM images of E. faecalis biofilms treated with aPDT”。研究人员用 CLSM 观察经过 aPDT 和其他处理后的生物膜。结果发现，用 0.01% 亚甲基蓝（methylene blue，MB）进行 aPDT 处理和 5% 次氯酸钠（sodium hypochlorite，NaOCl）处理后，不同时间点的牙本质圆盘上的E. faecalis生物膜里都有很多死细胞（显示为红色荧光），而用生理盐水冲洗的生物膜里大多是活细胞（显示为绿色荧光）。在牛牙本质块和人牙本质块中，aPDT 和 5% NaOCl 处理的暴露时间越长（12 分钟和 30 分钟），杀死的细菌就越多，而且杀菌速度在最初 3 分钟最快，之后就变慢了，12 分钟到 30 分钟之间杀死的细菌就很少了。同时，5% NaOCl 在每个时间点的杀菌效果都比 aPDT-MB 组更好。另外，年轻生物膜（1 周龄）比成熟生物膜（3 周龄）在 aPDT-MB 和 NaOCl 处理下，被杀死的细菌比例更高。这就好像年轻的细菌 “抵抗力” 更弱，更容易被消灭。

最后是 “SEM images of visible changes in dentin surfaces”。研究人员用 SEM 观察经过 aPDT-MB 处理后的牛牙本质表面，发现处理 12 分钟和 30 分钟后，牙本质表面结构没有明显变化，这说明 aPDT-MB 处理不会对牙本质造成明显损伤，是一种相对安全的处理方法。

综合研究结果和讨论部分，这项研究有着重要的意义。研究表明，0.01% MB 的 aPDT 确实具有杀死牙本质上E. faecalis生物膜细菌细胞的能力，这为根管消毒提供了一种新的选择。虽然它的抗菌能力比 5% NaOCl 弱一些，但可以作为根管消毒的补充方法。而且，研究还发现年轻的E. faecalis生物膜更容易被消毒处理消灭，这让医生们在治疗时可以更有针对性。不过，aPDT 的实际临床应用还有很多需要探索的地方，比如最佳的激光参数设置、与其他消毒方法的联合使用等。但无论如何，这项研究就像在黑暗中点亮了一盏灯，为未来牙髓和根尖周疾病的治疗带来了新的希望，让我们离彻底战胜这些 “细菌小怪兽” 又近了一步。