CCNB2—— 胃癌治疗新希望？揭秘其调控 PI3K/Akt 通路抑制肿瘤发生的关键作用

为解决胃癌治疗难题，兰州大学第一临床医学院等单位的研究人员开展 CCNB2 与胃癌关系的研究。结果发现 CCNB2 影响胃癌细胞增殖、迁移等，与 PI3K/Akt 通路有关。该研究为胃癌治疗提供新靶点，值得科研读者一读。

　　

在全球范围内，胃癌（Gastric cancer，GC）就像一个隐藏在暗处的 “健康杀手”，严重威胁着人们的生命健康。每年，全球有超过 100 万例确诊的胃癌病例，尽管近年来放疗、化疗和新辅助治疗等方面取得了一些进展，但晚期胃癌患者的生存率依旧低得令人揪心。手术虽然是治疗胃癌的主要方式，早期胃癌患者通过手术治疗，5 年生存率能高达 90%，可大部分患者在确诊时就已经是晚期了。所以，找到一个精准度高的肿瘤标志物，探索新的治疗策略，成为了医学领域亟待攻克的难题。

细胞周期蛋白（Cyclin proteins）在真核细胞中广泛分布，就像细胞周期的 “指挥官”，在细胞周期中呈现周期性振荡。它们的异常表达常常会引发肿瘤的发生和发展。比如，细胞周期蛋白 D1（Cyclin D1）在人类肾癌组织中的阳性发生率与肿瘤分级有关；异常的 Cyclin D1 表达会促使肝癌细胞增殖。还有，细胞周期蛋白 A2（Cyclin A2）在结直肠癌组织中明显上调，且与患者的总生存结局显著相关；细胞周期蛋白 E1（Cyclin E1）则在肝癌的起始阶段发挥着关键作用。这些都表明细胞周期蛋白在各种恶性肿瘤中都扮演着重要角色。

CCNB2 作为细胞周期蛋白家族的一员，主要在细胞周期的 G2/M 期转换中发挥作用。它在多种恶性肿瘤中都存在异常表达，像在非小细胞肺癌和胶质瘤中，CCNB2 表达升高，而且表达越高，患者预后越差；在结直肠癌和乳腺癌中，CCNB2 也有着重要作用。可奇怪的是，CCNB2 与胃癌之间的关系，却很少有人深入研究。

为了弄清楚 CCNB2 与胃癌之间的秘密，来自兰州大学第一临床医学院等单位的研究人员，在《Scientific Reports》期刊上发表了一篇名为 “Knockdown of CCNB2 inhibits the tumorigenesis of gastric cancer by regulation of the PI3K/Akt pathway” 的论文。他们发现，CCNB2 在人类胃癌组织中高表达，还与胃癌患者不良的生存预后密切相关。抑制 CCNB2 的表达，可以抑制胃癌细胞的增殖、迁移，还能通过调节 PI3K/Akt 信号通路，影响胃癌的发生发展。这一发现为胃癌的治疗提供了新的潜在靶点和治疗思路，意义重大。

研究人员为了开展这项研究，用到了好几种关键技术方法。他们利用生物信息学，通过 GEPAI、Timer、GEO 等在线数据库，分析 CCNB2 在胃癌及癌旁组织中的表达情况；还使用了免疫组织化学染色和评分的方法，来检测 CCNB2 等蛋白在组织中的表达；用实时聚合酶链反应（qPCR）来测定相关基因的表达水平；通过慢病毒和质粒转染技术，改变细胞中 CCNB2 等基因的表达；此外，RNA 测序（RNA-seq）帮助他们探究 CCNB2 对细胞转录组的影响，还有各种细胞实验和动物实验，如 CCK8 细胞增殖实验、细胞周期分析、裸鼠移植瘤模型实验等，从不同角度揭示 CCNB2 在胃癌中的作用。

下面咱们一起来看看具体的研究结果：

CCNB2 在胃癌中的表达及其预后意义

研究人员通过查询 GEPAI2、TIMER 数据库和 GEO 数据，发现 CCNB2 在多种肿瘤中表达升高，尤其是在胃癌（STAD）组织中，其表达明显高于正常组织。利用 Kaplan-Meier plotter 在线数据库分析发现，CCNB2 低表达的胃癌患者，总生存期（OS）和无进展生存期（FP）都更长。而且，通过绘制受试者工作特征曲线（ROC 曲线），发现 CCNB2 作为诊断生物标志物的准确性很高，曲线下面积（AUC）达到了 0.911。这一系列结果都表明，CCNB2 在胃癌组织中高表达，还和患者不良预后有关。

CCNB2 高表达与胃癌患者不良预后相关

免疫组化分析显示，胃癌组织中 CCNB2 的表达水平比正常胃组织高很多，而且 CCNB2 高表达的患者预后更差。进一步探究临床特征发现，CCNB2 的表达与胃癌的 T 分期和 N 分期有关。Western blot 分析也证实，在六对匹配的胃癌和癌旁非肿瘤组织中，CCNB2 的表达水平在胃癌组织中更高。这些结果进一步说明了 CCNB2 在胃癌发生过程中起着重要作用。

CCNB2 下调显著削弱胃癌细胞活性

研究人员检测了 GES-1、HGC-27、MKN-45 和 AGS 细胞系中 CCNB2 的表达，发现 MKN-45 和 AGS 细胞中 CCNB2 表达较高，HGC-27 细胞中表达较低。他们通过转染 siRNA 抑制 MKN-45 和 AGS 细胞中 CCNB2 的表达，用慢病毒转导上调 HGC-27 细胞中 CCNB2 的表达。结果发现，抑制 CCNB2 后，MKN-45 和 AGS 细胞的迁移能力明显减弱，细胞周期中 G-M 期的时间延长，增殖能力也受到显著抑制；而在 HGC-27 细胞中，过表达 CCNB2 则增强了细胞的增殖能力。此外，研究还发现，CCNB2 表达降低时，E-cadherin 表达增加，N-cadherin 和 Vimentin 等表达减少，这意味着抑制 CCNB2 可以抑制胃癌细胞的上皮 - 间质转化（EMT）过程。

敲低 CCNB2 显著抑制胃癌细胞在体内的增殖

研究人员建立了裸鼠移植瘤模型，将稳定转染 CCNB2 的 MKN-45 和 HGC-27 细胞注射到裸鼠腋窝皮下。结果显示，敲低 CCNB2 的 MKN-45 细胞形成的肿瘤更小、更轻，生长速度也更慢，肿瘤组织中 CCNB2 和增殖细胞核抗原（PCNA）的表达降低；而过表达 CCNB2 的 HGC-27 细胞形成的肿瘤更大、更重，生长速度更快，但肿瘤组织中 CCNB2 和 PCNA 的表达没有明显变化。这表明，降低 CCNB2 的表达可以减弱胃癌细胞在体内的增殖能力。

CCNB2 通过 PI3K/AKT 信号通路增强 RHBDL2 的表达

为了探究 CCNB2 促进胃癌发展的分子机制，研究人员进行了 RNA 测序分析。结果发现，敲低 CCNB2 后，有 2000 个基因的表达发生了变化，其中 1375 个基因上调，625 个基因下调。基因本体（GO）分析和基因集富集分析（GSEA）显示，差异表达基因主要与 PI3K-Akt 信号通路等相关。通过 PCR 验证和 Western blot 分析，发现 CCNB2 表达降低时，RHBDL2 的表达也会下降，而且 CCNB2 的变化主要集中在 PI3K/AKT 信号通路。进一步研究发现，下调 CCNB2 会抑制 PI3K/AKT 信号通路的活性，而过表达 CCNB2 则会增强该通路的活性。这说明在胃癌中，CCNB2 可以通过激活 PI3K/AKT 信号通路，促进胃癌细胞的增殖和迁移。

CCNB2 与 RHBDL2 的相互作用

研究人员通过免疫共沉淀（CO-IP）实验，证实了 CCNB2 和 RHBDL2 之间存在相互作用。为了进一步验证 CCNB2 通过 RHBDL2 调节胃癌细胞恶性表型的作用，他们进行了挽救实验。在敲低 CCNB2 的同时过表达 RHBDL2，结果发现，过表达 RHBDL2 可以部分或完全缓解因 CCNB2 敲低导致的 EMT 相关蛋白减少和 PI3K/AKT 通路抑制，细胞的增殖和侵袭能力也得到了增强。这表明 CCNB2 可以通过与 RHBDL2 相互作用，激活 PI3K/AKT 信号通路，从而促进胃癌细胞的迁移。

总的来说，这项研究表明 CCNB2 在胃癌中显著上调，与不良的临床结局密切相关。抑制 CCNB2 可以抑制胃癌细胞的增殖、侵袭和迁移，诱导细胞周期 G2-M 期阻滞，还能通过 CCNB2 - RHBDL2 - PI3K/AKT 轴影响胃癌细胞的 EMT 过程。这一研究成果为理解 CCNB2 在胃癌疾病进展中的作用提供了坚实的科学依据，也为将 CCNB2 作为胃癌患者的生物标志物和潜在治疗靶点提供了可能性。不过，研究也存在一些局限性，比如临床样本量还可以再增加，对 RHBDL2 功能机制的分析还需要更深入研究，未来还需要设计针对 CCNB2 的抑制剂，为临床前研究奠定基础。但不管怎么说，这项研究都为胃癌的研究和治疗开辟了新的方向，让我们在对抗胃癌的道路上又前进了一步。