基于LmCen-/-减毒活疫苗的犬内脏利什曼病三阶段自然暴露保护性研究：突尼斯现场试验验证

本研究针对犬内脏利什曼病(CVL)防控难题，通过构建L. major Centrin基因缺失(LmCen-/-)减毒活疫苗，在突尼斯自然疫源地开展三阶段现场试验。研究证实该疫苗通过诱导Th1型免疫应答(IFN-γ+ CD4+ T细胞)可实现82.5%保护效率，为阻断人畜共患内脏利什曼病(ZVL)传播链提供新型干预策略。

　　

在热带病防控领域，由利什曼原虫(Leishmania)引发的人畜共患病始终是重大公共卫生挑战。其中，婴儿利什曼原虫(L. infantum)通过白蛉媒介传播导致的犬内脏利什曼病(CVL)，不仅是造成犬类死亡的主要原因，更是人类内脏利什曼病(ZVL)的重要传染源。尽管现有商业疫苗如Leishmune?已投入使用，但其需要多次接种且保护效力有限。更棘手的是，实验室环境下验证的疫苗效果往往在自然传播条件下大打折扣——这与白蛉唾液成分、寄生虫排泄物等复杂生物因素对免疫应答的干扰密切相关。

为解决这一难题，突尼斯巴斯德研究所(Elyes Zhioua团队)联合美国FDA等机构开展了一项突破性研究。研究人员利用CRISPR-Cas9基因编辑技术构建了L. major Centrin基因缺失株(LmCen^-/-)，这种减毒活疫苗保留了完整抗原谱但丧失致病性。相关成果发表在《npj Vaccines》的研究表明，该疫苗在自然暴露条件下可实现对CVL的长期保护，保护效力达82.5%，为阻断人-犬-白蛉传播链提供了新工具。

研究团队采用三大关键技术方法：1) CRISPR-Cas9构建LmCen^-/-减毒株；2) 突尼斯北部自然疫源地现场试验设计(3年队列研究，n=22)；3) 多维度评估体系(寄生虫负荷qPCR、Th1/Th2细胞因子检测、临床评分系统)。实验用犬通过耳部皮内接种10⁶剂量疫苗后，在疫区经历三个白蛉活跃季的自然暴露。

研究结果部分揭示：

1. 疫苗安全性特征：接种部位无不良反应，血液生化指标保持正常范围，证实LmCen^-/-符合疫苗安全性要求。

   

2. 免疫原性分析：疫苗诱导显著IgG抗体反应(OD值提升3倍)和IFN-γ⁺ CD4⁺ T细胞应答(较对照组高5倍)，显示典型Th1型免疫极化。

   

3. 自然暴露保护：经过3年现场试验，疫苗接种组仅1/11犬出现临床症状和PCR阳性，而对照组达4/11。脾脏细胞因子分析显示接种组维持较高IFN-γ/IL-10比值(2.8 vs 1.3)。

   

4. 传播动力学监测：通过CDC诱捕器证实疫区白蛉(主要为P. perniciosus)感染率在0.037%-0.15%之间，揭示疫苗在低感染压力下仍具保护性。

这项研究具有三重重要意义：首先，首次证实皮肤利什曼原虫减毒株可交叉保护内脏型感染，拓展了"利什曼化"概念的应用范围；其次，建立自然暴露条件下的疫苗评估金标准，克服实验室攻毒与现场效果的差距；最后，单剂无佐剂方案优于现有商业疫苗(如需3剂的Leish-Tec?)，更具现场适用性。正如讨论部分强调，该疫苗成功模拟了自然感染后的保护性免疫，又不引发疾病，为开发人用利什曼病疫苗提供了重要范式。未来研究需进一步阐明其对人源L. donovani的保护效果，并探索大规模生产的技术路径。