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为解决膀胱癌治疗难题，台湾多单位研究人员开展乐伐替尼对膀胱癌作用的研究。结果显示其可增强顺铂敏感性、诱导凋亡、抑制转移。该研究为膀胱癌治疗提供新方向，极具科研价值，推荐科研读者阅读。
台湾卫生福利部桃园总医院泌尿科等多单位的研究人员 Chih-Hung Chiang、Jr-Di Yang、Wei-Lin Liu 等在《Cancer Cell International》期刊上发表了题为 “Mechanistic insights of lenvatinib: enhancing cisplatin sensitivity, inducing apoptosis, and suppressing metastasis in bladder cancer cells through EGFR/ERK/P38/NF-κB signaling inactivation” 的论文。这篇论文在膀胱癌治疗领域意义重大，为探寻膀胱癌新的治疗策略提供了关键的理论依据和实践方向，有望改善膀胱癌患者的治疗现状。
一、研究背景
膀胱癌作为最常见的尿路上皮癌，主要分为非肌层浸润性膀胱癌（NMIBC）和肌层浸润性膀胱癌（MIBC） 。目前，传统治疗手段如根治性膀胱切除术、化疗和放疗，常因癌症的高复发率和转移率而受限，治疗效果难以令人满意。因此，探索能够降低膀胱癌复发和转移风险的辅助治疗方法，成为提升膀胱癌治疗效果的关键研究方向。
表皮生长因子受体（EGFR）是一种酪氨酸激酶跨膜受体，在膀胱癌中，其过表达与肿瘤进展密切相关，还会导致患者预后不佳。EGFR 能够激活下游致癌通路，促进癌细胞的生长、抗凋亡、转移、血管生成以及上皮 - 间质转化（EMT，上皮细胞失去极性和细胞间连接，转化为具有间质细胞特性的过程，该过程有助于癌细胞转移）等过程。已有研究表明，抑制 EGFR 不仅能抑制膀胱癌生长，还可提高其对放疗的敏感性，例如厄洛替尼作为 EGFR 抑制剂，对接受根治性膀胱切除术的膀胱癌患者有辅助治疗效果。
乐伐替尼（Lenvatinib）是一种多激酶抑制剂，能通过靶向致癌和血管生成激酶，如成纤维细胞生长因子（FGF）受体、酪氨酸蛋白激酶 KIT（CD117）、血管内皮生长因子（VEGF）受体和血小板衍生生长因子受体等，促使肿瘤消退。此前研究发现，乐伐替尼在非小细胞肺癌（NSCLC）和肝细胞癌（HCC）治疗中，可通过减弱 AKT、蛋白激酶 C delta（PKC - δ）和丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路来抑制肿瘤进展。然而，乐伐替尼抑制膀胱癌进展的过程中，EGFR 信号通路的抑制作用尚不明确。所以，本研究旨在探究乐伐替尼对 EGFR 信号介导的膀胱癌进展的抑制效果。
二、研究方法
细胞培养 ：人膀胱癌 T24 细胞系和小鼠膀胱癌 MB49 细胞系购自台湾生物资源保存及研究中心（BCRC），TSGH - 8301 细胞系由中国医药大学 Jing - Gung Chung 教授实验室提供。细胞培养于添加 10% 胎牛血清、1% 青霉素 - 链霉素和 L - 谷氨酰胺的 McCoy’s 5A 培养基、RPMI 1640 培养基或 DMEM 高糖培养基中，在 37°C、5% MTT 检测 ：在 96 孔板中接种细胞，分别加入不同浓度的乐伐替尼、顺铂或两者组合，培养 24 和 48 小时后，加入 MTT 溶液，再用二甲基亚砜（DMSO）溶解，通过酶标仪检测 570nm 波长处的吸光度，评估细胞活力。构建 NF - κB 报告基因系统及相关检测 ：在 TSGH - 8301 细胞中利用质粒构建 NF - κB 报告基因系统，转染后用 G418 筛选稳定克隆。通过 NF - κB 报告基因检测不同处理下 NF - κB 的激活情况。细胞周期、凋亡及相关信号通路检测 ：使用流式细胞术进行细胞周期分析、Annexin V/PI 双染检测细胞凋亡、检测 caspase - 3、8、9 及 FAS - L/FAS 激活情况、检测线粒体膜电位（MMP）变化；采用蛋白质免疫印迹法（Western blotting）检测相关蛋白表达；运用免疫荧光核转位实验观察 NF - κB 的核转位情况。迁移和侵袭实验 ：使用 Transwell 小室，分别进行有无基质胶（Matrigel）包被的实验，检测细胞迁移和侵袭能力。动物实验 ：选取六周龄雄性 C57BL/6JNarl 小鼠，皮下接种 MB49 细胞构建肿瘤模型。将小鼠分组，分别给予不同处理，记录体重，实验结束后获取肿瘤进行分析；对肿瘤及其他组织进行苏木精 - 伊红（H&E）染色和免疫组化（IHC）染色。统计分析 ：采用 Student’s t 检验和单因素方差分析（one - way ANOVA），使用 GraphPad Prism 7 软件进行统计，P < 0.05 为差异具有统计学意义，实验均独立重复三次。
三、研究结果
乐伐替尼对膀胱癌细胞的毒性及与顺铂的协同作用 ：MTT 实验表明，乐伐替尼对 TSGH - 8301、T24 和 MB49 细胞系的毒性呈剂量和时间依赖性，48 小时的乐伐替尼对膀胱癌基因模式及 EGFR/ERK/P38/NF - κB 信号通路的影响 ：Western blotting 分析显示，肿瘤细胞（T24 和 TSGH - 8301）中 NF - κB 表达高于正常细胞（SVHUC - 1），且顺铂处理可使 TSGH8301/NF - κB - luc2 细胞中 NF - κB 激活呈剂量依赖性。NF - κB 报告基因检测表明，乐伐替尼、厄洛替尼（EGFR 抑制剂）、PD98059（ERK 抑制剂）和 SB20580（P38 抑制剂）可调节 NF - κB 激活。乐伐替尼能有效抑制顺铂诱导的 EGFR 和 NF - κB 磷酸化，以及 EGF 介导的 EGFR 激活，还可减少 EGFR 通路下游蛋白（ERK、P38 和 NF - κB）的磷酸化，且抑制作用呈剂量依赖性。乐伐替尼对膀胱癌转移和抗凋亡相关因子的调控作用 ：迁移和侵袭实验显示，乐伐替尼可抑制膀胱癌细胞的侵袭和迁移能力。对 EMT 相关因子的研究发现，乐伐替尼可使 Twist、Snail - 1、ZEB - 1 和 ZEB - 2 表达下降，同时诱导上皮标记物 E - cadherin 表达增加，间充质标记物 N - cadherin 表达减少，还可降低转移因子 MMP9 的表达。此外，乐伐替尼能抑制膀胱癌细胞的抗凋亡作用，降低抗凋亡因子 MCL - 1、c - FLIP 和 XIAP 的表达。乐伐替尼及其与顺铂联合用药在体内的抗肿瘤效果及安全性 ：动物实验中，随着乐伐替尼剂量增加，对 MB49 荷瘤小鼠的肿瘤抑制效果增强，且未引起小鼠体重变化、肝功能指标（AST、ALT 和 γGT）改变及心、肝、肾等组织病理变化。联合用药实验表明，乐伐替尼与顺铂联合使用的肿瘤抑制效果优于单药治疗，且对小鼠体重和正常组织无明显不良影响。乐伐替尼在体内诱导凋亡及抑制 EGFR/ERK/P38/NF - κB 信号通路的验证 ：在体内模型中，乐伐替尼可激活 caspase - 3、 - 8 和 - 9，抑制抗凋亡因子 MCL - 1、c - FLIP 和 XIAP 的表达，降低转移因子 MMP9 的表达，调节 EMT 相关因子（抑制 Twist、Snail1、ZEB - 1 和 ZEB - 2，增加 E - cadherin，减少 N - cadherin），并显著抑制 EGFR、ERK、P38 和 NF - κB 的磷酸化，且呈剂量依赖性。
四、研究结论与讨论
本研究表明，乐伐替尼可通过外源性和内源性途径诱导膀胱癌细胞凋亡，增强膀胱癌细胞对顺铂的敏感性，同时破坏 EGFR/ERK/P38/NF - κB 轴介导的癌细胞存活和转移潜能。这意味着乐伐替尼有望成为膀胱癌治疗的新选择，无论是单独使用还是与顺铂联合使用，都具有潜在的临床应用价值。
EGFR 过表达与膀胱癌的肌肉浸润和复发密切相关，其激活可通过下游致癌通路促进肿瘤进展，NF - κB 在 EGFR 介导的肿瘤生长、存活和转移中起关键作用，ERK 和 P38 等丝裂原活化蛋白激酶参与调节 NF - κB 激活。本研究发现，乐伐替尼可抑制 EGFR/ERK/P38/NF - κB 信号通路，且能抑制顺铂诱导的 EGFR/NF - κB 激活，增强顺铂对膀胱癌细胞的毒性。此外，乐伐替尼还可降低抗凋亡蛋白（MCL - 1、c - FLIP 和 XIAP）的表达，这些蛋白的减少有助于提高顺铂的抗癌效果。
同时，乐伐替尼抑制膀胱癌转移的作用也十分显著。它可抑制 EMT 相关蛋白（Twist、Snail、ZEB1 和 ZEB2）和 MMP9 的表达，这些蛋白与膀胱癌的侵袭、复发和不良预后密切相关。乐伐替尼通过抑制这些蛋白，有效减少了癌细胞的转移能力。
总的来说，该研究为膀胱癌的治疗提供了新的理论依据和潜在治疗方案。乐伐替尼在诱导癌细胞凋亡、抑制肿瘤转移以及增强现有化疗药物疗效方面展现出的优势，使其成为膀胱癌治疗领域极具潜力的药物，有望为膀胱癌患者带来新的希望，未来可进一步开展临床试验，验证其在人体中的治疗效果和安全性 。
