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急性髓系白血病（AML）免疫治疗受限于已知靶点少。研究人员针对此开展靶向组织蛋白酶 G（CG）衍生肽的免疫疗法研究。结果显示，CG1/A2xCD3 双特异性抗体在体内外对 HLA-A2+AML 有显著杀伤作用且不影响正常造血，为 AML 免疫治疗提供新方向。
在血液癌症的治疗领域，急性髓系白血病（AML）一直是个棘手的难题。尽管异基因干细胞移植（allo-SCT）在 AML 治疗上取得了一定成果，证明了免疫疗法对 AML 有治疗潜力，但目前 AML 免疫治疗面临着一个重大挑战，那就是已知的可靶向髓系白血病抗原非常有限。大多数现有的 AML 免疫治疗靶点是正常造血细胞也会表达的表面分子，这就导致在治疗过程中难以精准地攻击癌细胞，同时避免对正常细胞的损伤。寻找肿瘤相关的细胞内抗原作为免疫治疗靶点成为了研究的关键方向。
来自美国德克萨斯大学 MD 安德森癌症中心（University of Texas MD Anderson Cancer Center）的研究人员开展了一项极具意义的研究。他们聚焦于髓系嗜天青颗粒中丰富的细胞内白血病抗原，发现组织蛋白酶 G（Cathepsin G，CG）在 AML 原始细胞中高表达，且其衍生的肽段 CG1（FLLPTGAEA）能够与 HLA-A*0201（HLA-A2）结合，成为潜在的免疫治疗靶点。基于此，研究人员设计并制备了一种新型的靶向 CG1/HLA-A2 的双特异性抗体 CG1/A2xCD3，旨在探索其对 AML 的治疗效果。
这项研究意义重大。如果能够成功利用 CG1/A2xCD3 治疗 AML，将为众多患者带来新的希望。它有望打破 AML 免疫治疗靶点匮乏的困境，为精准治疗提供有力的武器。该研究成果发表在《Leukemia》杂志上。
研究人员在研究过程中用到了几个主要关键的技术方法。首先，通过质谱分析（MS）技术从白血病细胞表面洗脱肽段，鉴定 CG1 肽的表达情况。其次，运用单 B 细胞克隆技术获取靶向 CG1/HLA-A2 的抗体，并构建双特异性抗体 CG1/A2xCD3。此外，利用流式细胞术进行细胞结合、细胞毒性、T 细胞激活和表型分析等实验，还通过体内实验评估抗体的治疗效果。研究样本来自健康供体（HD）和患者，经机构审查委员会批准并获得知情同意后采集。
研究结果
- CG1 在 HLA-A2+髓系白血病中的表达：研究人员利用免疫沉淀和靶向飞行时间质谱（ToF-MS）技术，检测了多种细胞系中 CG1 肽的表达。结果发现，CG1 在所有 HLA-A2+髓系白血病细胞系中均有表达，在原本 HLA-A2 阴性但转导了 HLA-A2 的细胞系中表达水平更高。而在非髓系恶性肿瘤细胞系、正常 HLA-A2 粒细胞和外周血单个核细胞（PBMC）中未检测到 CG1，这表明 CG1 是 HLA-A2+髓系白血病细胞表面特有的抗原，可作为潜在的治疗靶点。
- CG1/A2xCD3 的特性：通过 SDS-PAGE 凝胶电泳确认了 CG1/A2xCD3 的结构。利用生物膜层干涉技术（BLI）测定其结合亲和力，发现 CG1/A2xCD3 对 CD3e 和 CG1/HLA-A2 单体均具有高结合亲和力，且对 CG1/HLA-A2 的亲和力高于 CD3e 臂对其配体的亲和力。Meso Scale Discovery（MSD）平台检测显示该抗体对 CG1/A2 具有高特异性，与其他蛋白的交叉反应可忽略不计。细胞实验也进一步证实了其对表达 CG1 的细胞系和 T 细胞的高亲和力结合。
- CG1/A2xCD3 裂解 HLA-A*0201 AML 细胞：将正常 PBMC 与髓系白血病细胞系共培养，经流式细胞术检测发现，CG1/A2xCD3 处理组的 T 细胞激活和细胞因子分泌水平均高于对照双特异性抗体处理组。体外基于流式细胞术的细胞毒性实验表明，CG1/A2xCD3 能够显著杀伤 HLA-A2+髓系白血病细胞，且细胞毒性具有 HLA-A2 依赖性，对 HLA-A2 阴性细胞系无杀伤作用。
- CG1/A2xCD3 在体内消除 AML：在体内实验中，将表达荧光素酶的 AML 细胞系或原发性 AML 患者的原始细胞移植到亚致死照射的 NOD/SCID gamma（NSG）小鼠体内，再给予 CG1/A2xCD3 或对照抗体治疗。生物发光成像、组织学分析和流式细胞术检测结果显示，CG1/A2xCD3 在所有剂量水平下均表现出强大的抗白血病活性，能够显著降低小鼠骨髓中的白血病细胞数量，提高小鼠生存率，且不会引起明显的移植物抗宿主病。
- CG1/A2xCD3 对健康供体造血功能的影响及特异性：CFU 实验表明，CG1/A2xCD3 处理组与未处理组和同型对照抗体处理组的健康供体 HLA-A2 骨髓祖细胞形成的集落数量相似，说明该抗体不会显著损害正常造血功能。利用 CG 敲除（KO）克隆进行的体外细胞毒性实验显示，CG1/A2xCD3 对表达 CG1 的 AML 细胞具有特异性杀伤作用，对 CG-KO 克隆的杀伤作用明显减弱。
研究结论与讨论
研究人员成功制备了靶向 CG 的双特异性抗体 CG1/A2xCD3。该抗体能够特异性结合 CG1/HLA-A2 和 CD3，激活 T 细胞，在体内外对 HLA-A2+髓系白血病细胞表现出强大的杀伤活性，且对正常造血功能无明显抑制作用。与传统 T 细胞受体（TCR）相比，TCR 模拟（TCR-m）抗体具有更高的亲和力，能够克服 TCR 与抗原低亲和力的障碍，更有效地靶向 AML 细胞。
双特异性抗体 CG1/A2xCD3 具有独特的优势。其制备过程采用人源化小鼠模型，产生的全人源抗体对靶抗原具有高亲和力。同时，它靶向的是前导序列（LS）衍生的肽段，为 LS 衍生肽作为肿瘤抗原提供了新的思路，尤其在 HLA-A*0201 和抗原加工机制（APM）缺陷的细胞中具有重要意义。虽然 CG1/A2xCD3 仅适用于 HLA-A2 阳性患者，但 HLA-A2 在多个种族中频率约 50%，适用人群广泛。
然而，研究也存在一定局限性。研究中评估的脱靶毒性实验针对的肽 / HLA 抗原数量有限，鉴于其他免疫治疗药物曾出现过临床前研究未发现的严重毒性，在将 CG1/A2xCD3 应用于临床时，需谨慎制定给药策略和严格监测毒性参数。总体而言，该研究验证了靶向 CG1 的免疫疗法在髓系白血病治疗中的有效性和安全性，为 AML 及其他可能相关肿瘤的免疫治疗开辟了新方向，具有重要的临床转化价值。
