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在癌症治疗中，肿瘤免疫治疗面临挑战。为提升疗效，研究人员开展针对三特异性三体抗体（53X tribodies）的研究。结果显示，其激活人外周血单个核细胞更有效，能增强肿瘤细胞毒性和细胞因子释放，53L10 可使肿瘤完全消退，为癌症治疗提供新思路。
在癌症治疗的战场上，传统化疗和放疗就像 “钝刀”，虽能杀敌，但也会 “误伤” 正常细胞，副作用明显。而肿瘤免疫治疗的出现，给患者带来了新希望。不过，目前的免疫治疗方法仍存在诸多难题。比如，嵌合抗原受体 T（CAR-T）细胞疗法在血液肿瘤治疗中效果显著，可它生产过程复杂、成本高昂，还可能带来慢性毒性副作用。双特异性 T 细胞衔接器（BiTEs）能有效招募免疫细胞攻击癌细胞，可肿瘤的免疫抑制环境却像 “盾牌”，限制了其疗效。免疫检查点抑制剂（ICIs）虽能打破肿瘤的免疫逃逸，但仅对部分患者有效。
为了突破这些困境，来自意大利那不勒斯 “费德里科二世” 大学（University of Naples “Federico II”）、Ceinge - 先进生物技术公司（Ceinge - Biotecnologie Avanzate S.C. a.R.L）、意大利米兰大学欧洲分子医学院（European School of Molecular Medicine, University of Milan）以及日本 Chiome Bioscience Inc 的研究人员携手，开展了一项意义重大的研究。他们设计并合成了一系列三特异性三体抗体（53X tribodies），旨在将 T 细胞招募能力与免疫检查点（IC）通路调节功能相结合，以克服肿瘤免疫抑制环境。研究结果令人振奋，这些三特异性三体抗体在激活人外周血单个核细胞（PBMCs）方面，比临床验证的单克隆抗体（mAbs）更有效，能显著增强肿瘤细胞毒性和细胞因子释放，其中 53L10 三体抗体在体内甚至可使肿瘤完全消退。该研究成果发表在《Cell Death Discovery》上，为癌症免疫治疗开辟了新方向。
研究人员主要运用了以下关键技术方法：通过生物层干涉技术（BLI）分析三体抗体与靶点的结合动力学；利用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测靶点表达、抗体与细胞的结合能力以及细胞因子分泌水平；采用细胞毒性实验评估三体抗体对肿瘤细胞的杀伤效果；借助流式细胞术分析 T 细胞激活标记物；构建动物模型评估三体抗体的体内抗肿瘤疗效。
结合特性研究
研究人员将新生成的 53L10、53D 和 53G 三体抗体，与临床使用的免疫调节 mAbs 进行对比。BLI 分析表明，53L10、53D 和 53G 能与相应纯化靶点结合，亲和力在 5 - 7nM。虽然相较于临床验证的 mAbs，它们对重组蛋白的亲和力稍低，但在激活的淋巴细胞上，其结合亲和力可达到亚纳摩尔范围。在肿瘤细胞上，53L10 凭借对 5T4 和 PD - L1 的双重结合能力，展现出最高的结合亲和力，而在低表达 PD - L1 的 Li - 7 细胞上，其结合力较低，这进一步证实了其结合特性与靶点表达水平相关。
细胞毒性及细胞因子分泌研究
在共培养体系中，研究人员以 MDA - MB - 231 和 A - 549 细胞为研究对象，将其与 PBMCs 共培养。结果显示，除了作为阴性对照的 53P，所有新型三体抗体诱导肿瘤细胞毒性的效果，都优于临床使用的 mAbs 与 53P 的组合。其中，53L10 的效果最为突出，能使乳酸脱氢酶（LDH）释放增加两倍。同时，53L10 还能显著促进干扰素 γ（IFNγ）和白细胞介素 - 2（IL - 2）的分泌，且呈剂量依赖性，比组合治疗能多增加 4 - 5 倍的细胞因子水平。通过对 T 细胞激活标记物的染色分析发现，53L10 诱导 T 细胞激活标记物（CD69 和 CD25）的表达上调更为显著，表明其能直接高效激活 T 细胞。
与其他双特异性抗体组合的比较研究
研究人员还将 53L10、53D 和 53G 与 53P 和免疫调节双特异性三体抗体（如 0304（PD - L1/LAG - 3）和 0506（PD - 1/LAG - 3））的组合进行比较。结果表明，所有新型三体抗体诱导的肿瘤细胞毒性，均强于 53P 与这些免疫调节双特异性抗体的组合，再次证明了新型三特异性三体抗体在肿瘤治疗中的优势。
体内抗肿瘤疗效研究
在 A - 549 细胞异种移植小鼠模型中，研究人员对 53L10、53P 和阿替利珠单抗（atezolizumab）进行了体内抗肿瘤疗效评估。结果显示，53L10 表现出最强的肿瘤生长抑制效果，肿瘤生长抑制率（TGI）高达 96 - 100%，8 只小鼠中有 5 只肿瘤完全消退。而阿替利珠单抗的 TGI 仅为 34.8%，53P 的抑制效果更弱，二者联合治疗的效果也不及 53L10。
综上所述，该研究成功设计并验证了三特异性三体抗体的抗肿瘤潜力。这些三体抗体不仅能有效激活 T 细胞，增强肿瘤细胞毒性，还能克服肿瘤免疫抑制环境。特别是 53L10 三体抗体，展现出卓越的体内外抗肿瘤效果。研究结果明确了将免疫调节部分插入双特异性三体抗体，可显著提高其抗肿瘤疗效，为开发针对多种肿瘤抗原的新型 T 细胞衔接器提供了重要理论依据和实践指导，有望推动癌症免疫治疗领域的进一步发展，为更多癌症患者带来新的希望。
