基于脑脊液游离DNA的NGS分析揭示MRI阴性CNS复发的高级别B细胞淋巴瘤克隆起源

本研究针对高级别B细胞淋巴瘤(HGBCL)中枢神经系统(CNS)复发诊断难题，通过整合下一代测序(NGS)技术对脑脊液(CSF)游离DNA(cfDNA)进行多组学分析，成功在MRI阴性患者中鉴定出与原发性肿瘤具有克隆关联的CNS复发灶，并完成DLBCL/HGBL-MYC/BCL2分子分型。该研究为淋巴瘤CNS浸润提供了超越传统影像学和细胞学检测的分子诊断新策略。

　　

在血液肿瘤领域，高级别B细胞淋巴瘤(HGBCL)始终是临床医生面临的重大挑战，特别是当肿瘤细胞突破血脑屏障侵袭中枢神经系统(CNS)时，患者预后往往急转直下。传统诊断依赖于组织活检和影像学检查，但前者在CNS病灶中难以获取，后者对微小病灶灵敏度有限。更棘手的是，约10%的弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)患者伴随MYC/BCL2/BCL6基因重排，这类"双重打击"淋巴瘤具有特殊的临床生物学行为，但常规检测常出现漏诊。当患者出现神经系统症状却未见明确影像学病灶时，临床决策便陷入两难——是治疗过度还是延误时机？

来自布尔诺大学医院和CEITEC分子医学中心的研究团队在《Diagnostic Pathology》发表的研究，开创性地将脑脊液游离DNA(cfDNA)分析应用于这类临床困境。研究人员采用自主研发的LYNX NGS panel（覆盖394个淋巴瘤相关基因），对1例66岁男性患者的骨髓、脑脊液细胞DNA和cfDNA进行系统分析。关键技术包括：多色荧光原位杂交(mFISH)核型分析、高深度靶向测序(平均500×)、克隆性免疫球蛋白重排检测，以及创新性地将CSF cfDNA与细胞DNA平行比对。

[方法学亮点]

研究设计包含四个关键样本：诊断期骨髓DNA、复发期CSF cfDNA、CSF细胞DNA及血浆cfDNA。通过mFISH揭示复杂核型(47,XY)，NGS检出16个驱动突变(KMT2D/p.Leu2979ArgfsTer10等)，FISH确认IGH::BCL2融合(59%)。特别值得注意的是，CSF cfDNA产量仅14ng/10ml却成功完成全流程分析。

[结果精要]

分子特征关联部分显示，CSF cfDNA不仅重现了骨髓样本的全部突变谱（如BTG1/p.Val143Glu等），还发现新增的IGKV1-5/IGKJ4重排(100%)。表1数据揭示cfDNA突变频率普遍高于组织DNA（如KMT2D/p.Gln2634Ter从49.1%升至63.3%），暗示其更全面反映肿瘤异质性。影像学阴性时的CSF cfDNA已检测到chr8增益(MYC位点)和chr9/CDKN2A缺失等高危变异。

[突破性发现]

该研究实现三重突破：首次在MRI阴性情况下通过CSF cfDNA证实CNS复发；明确克隆演化关系（共享突变占93%）；完成WHO 5th要求的分子分型。图1D展示的关键变异t(8;22)(q24;q11)与t(14;18)(q32;q21)，为DLBCL/HGBL-MYC/BCL2诊断提供决定性证据。

[临床启示]

这项研究重塑了淋巴瘤CNS监测范式：①cfDNA分析灵敏度超越传统细胞学（176个CSF肿瘤细胞仍被FC漏诊）；②液态活检可替代高风险组织活检；③NGS整合分析能同时解决诊断分型、克隆追踪和预后评估三大需求。正如讨论强调，该方法对ALL-CELL junior等靶向方案的选择具有重要指导价值。

研究也存在cfDNA稳定性等技术瓶颈，但其开创的"影像学+液态活检+多组学"模式，为攻克血脑屏障导致的治疗监测难题提供了新思路。随着LYNX panel等工具的优化，这种策略或将成为淋巴瘤CNS浸润诊断的金标准。