吉西他滨联合黄芩素：靶向抑制猪流行性腹泻病毒增殖的新策略

为解决猪流行性腹泻病毒（PEDV）无特效临床药物的问题，研究人员开展了关于药物联合治疗 PEDV 的研究。结果发现吉西他滨和黄芩素分别抑制病毒复制和早期进入阶段，二者联用有协同效应。这为抗 PEDV 治疗提供了新方向。

　　在动物健康领域，猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus，PEDV）可谓是仔猪的 “健康杀手”。它属于冠状病毒科，基因组由单链正链 RNA 构成，而且已经演化出多个流行谱系。目前，针对 PEDV 感染，临床上还没有有效的药物，给养猪业带来了巨大损失。在这样的背景下，探寻有效的抗病毒治疗策略迫在眉睫。

华中农业大学的研究人员积极开展相关研究，致力于攻克这一难题。他们的研究成果发表在《Animal Diseases》上，为抗击 PEDV 带来了新的希望。

研究人员采用了多种关键技术方法。细胞实验方面，利用 Vero 细胞进行培养，通过不同处理观察细胞状态；核酸检测上，运用 RNA 提取和定量实时 PCR（qRT-PCR）技术，检测相关基因表达；此外，还有间接免疫荧光试验（IFA）用于直观观察病毒感染情况，50% 组织培养感染剂量试验（TCID₅₀ assay）测定病毒滴度等，这些技术为研究提供了有力支撑。

研究结果如下：

1. 吉西他滨抑制 PEDV 增殖：研究人员收集了包括吉西他滨在内的四种未报道的核苷酸类似物进行抗病毒活性测试。通过 IFA 和 TCID₅₀结果显示，吉西他滨处理组几乎无病变，病毒滴度显著降低，表明其在这些化合物中抗 PEDV 活性最显著。
2. 吉西他滨在复制阶段发挥抗病毒作用：CCK-8 细胞毒性试验表明吉西他滨的 CC₅₀>200 μM，安全性良好。不同浓度吉西他滨处理感染 PEDV 的细胞，IFA、TCID₅₀和 qRT-PCR 结果均显示其抗病毒活性呈浓度依赖性。进一步研究发现，吉西他滨主要抑制 PEDV 的复制阶段。
3. 黄芩素抑制 PEDV 增殖早期阶段：观察八种天然产物的细胞病变效应（Cytopathic effect，CPE），发现黄芩素组无 CPE 且能显著降低病毒滴度。CCK-8 试验确定其 CC₅₀>200 μM ，且其抑制 PEDV 增殖呈剂量依赖性。通过不同阶段试验表明，黄芩素主要抑制病毒早期进入阶段并直接灭活病毒。
4. 吉西他滨与黄芩素协同抑制 PEDV 增殖：鉴于二者作用阶段不同，研究人员将它们联合使用。CCK-8 试验表明联合用药对 Vero 细胞无毒性。联合处理感染 PEDV 的细胞，发现联合用药组病毒滴度比单药处理组显著降低，1 μM 吉西他滨和 1.5 μM 黄芩素组合协同效应最佳。

研究结论和讨论部分指出，吉西他滨和黄芩素通过不同机制抑制 PEDV 增殖，二者联合具有协同效应。吉西他滨的选择性指数大于 50，EC₅₀为 3.12 μM；黄芩素的 EC₅₀为 5.02 μM，选择性指数超过 33。这种联合治疗策略，能在降低药物剂量的同时增强抗病毒效果。虽然目前还需要在活体动物中进一步验证其联合疗效，但该研究为抗 PEDV 的组合治疗方案和抗病毒策略的制定提供了重要依据，有望推动相关领域的发展，为养猪业减少 PEDV 带来的损失提供新的思路和方法。