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本文聚焦经济合作与发展组织（OECD）非动物试验方法在日本的发展历程。介绍国际非动物试验方法的发展、验证及采用趋势，详述日本官方制定非动物试验方法的历史，展现日本在此领域的贡献与挑战，为相关研究提供参考。
非动物试验方法的发展背景
1959 年，Russel 和 Barch 提出动物试验的 3Rs 原则，即减少（Reduce）动物使用数量、优化（Refine）试验流程以减轻动物痛苦、采用非动物系统或无感知物种替代（Replace）动物进行试验。非动物试验方法（替代测试方法）正是遵循这一原则发展而来，旨在减少动物使用，提升动物福利。
国际非动物试验方法的发展与验证
20 世纪 60 年代，非动物测试方法开始发展，最初主要针对替代 Draize 眼或皮肤刺激试验、急性毒性试验（致死剂量：LD50） 。此后，针对眼刺激试验的多种替代方法研究不断涌现。20 世纪 90 年代，欧美化妆品行业协会开展大规模眼刺激试验验证研究，瑞典主导了细胞毒性试验替代急性毒性试验的合作研究，德国相关机构则引领腐蚀试验替代方法的验证工作。部分验证通过的方法被纳入 OECD 测试指南（TG），为化学物质安全性评估提供统一标准。
这些测试方法的建立依赖于强调可重复性和可预测性的验证研究。尤其是安全性评估，需要高可预测性的测试，即尽可能减少假阴性结果的测试方案。在验证过程中，不断优化测试方案，确定适用范围内高可预测性的测试方法。但在 20 世纪 90 年代，验证要求不明确，许多测试方法因无法满足要求，未被提交至 OECD 或在审核中被淘汰。
国际非动物试验方法的验证与采用趋势
为使验证方法更易获监管部门认可，1996 年 OECD 举办研讨会，确定新测试方法及修订方法的验证和监管接受原则与标准。2002 年又召开会议，进一步完善动物和非动物试验方法的验证及接受流程。基于此，2005 年发布 OECD GD No. 34 文件，为新测试方法的验证提供指导。
此前，全球已成立多个验证中心，如 1991 年美国的国家毒理学计划机构间替代毒理学方法评估中心（ICCVAM）、1997 年欧洲的欧洲替代方法验证中心（ECVAM，现名 EURL ECVAM） 。日本于 2005 年在国立卫生科学研究所（NIHS）内设立日本替代方法验证中心（JaCVAM） 。2009 年，ICCVAM、ECVAM、JaCVAM 和加拿大卫生部共同成立国际替代试验方法合作组织（ICATM） ，旨在促进国际间验证研究合作、独立同行评审和统一建议，推动替代方法全球认可。此后，韩国和巴西也相继成立相关中心并加入。
自 20 世纪 80 年代起，OECD 开始采用体外试验进行遗传毒性测试。2004 年后，其他非动物测试方法发展迅速，如皮肤腐蚀、光毒性等方面的替代方法不断涌现并被纳入 OECD TG。截至 2024 年 11 月，在 76 项与人类健康相关的 OECD TGs 中，31 项体外或体内化学测试方法被采纳为替代方法，全球开发的人类健康非动物测试方法已超 OECD TGs 采用测试方法的 40%。不过，现有非动物测试方法主要集中于皮肤刺激、光毒性等领域，用于检测全身毒性的方法较少被 OECD 接受，且这些方法适用范围有限，多只能用于化学物质危害识别，难以进行全面风险评估。
日本官方非动物试验方法制定的历史
在日本，早期针对眼刺激替代方法的验证研究存在诸多问题。如 Yasuo Ohno 博士团队开展的研究，虽规模大但仅针对化妆品原料，且缺乏独立同行评审，未获厚生劳动省（MHLW）认可。Tadao Ohno 博士团队的研究参与机构多，但数据不完整，统计分析耗时久。
2005 年 JaCVAM 成立，致力于推动监管研究中动物测试替代方法发展，遵循 3Rs 原则，评估测试方法实用性、局限性和适用性，与国内外相关组织合作。JaCVAM 通过验证研究和独立同行评审，评估日本开发的测试方法，已发布 20 多份验证和同行评审报告。
日本多个科学社团支持 JaCVAM 开展国际验证研究。如日本环境诱变剂学会（现日本环境诱变和基因组学会）的 MMS 研究小组，与国际机构合作推动彗星试验协议和验证报告达成国际共识，促使 OECD 于 2014 年正式确立 TG489：体内哺乳动物碱性彗星试验 。
测试方法开发者在方法验证前至关重要。J-TEC Corporation 对首个经 JaCVAM 验证的非动物测试方法贡献突出，其支持的 LabCyte EPI-MODEL24 SIT 皮肤刺激试验和 EPIMODEL24 SCT 皮肤腐蚀试验分别被纳入 OECD TG439 和 TG431 。众多开发者还在眼刺激、皮肤致敏等测试方法开发上成果显著，推动了日本在这些领域的国际影响力提升。此外，NIHS 专家和测试开发者共同推动了 16 项 OECD TGs（含动物试验方法）、4 项人类健康相关 TG 重大修订，以及国际人用药品技术要求协调会（ICH） S10 光安全性指南（含活性氧检测法）的制定，部分成果已在 OECD 和 JaCVAM 网站发布。
然而，Bhas 42 细胞转化试验虽经 JaCVAM 参与国际验证，但结果未达要求，暂未成为 OECD TG，仅作为 OECD 测试与评估系列文件第 231 号存在。目前，相关人员正尝试重新确立其 TG 地位。JaCVAM 推荐的 40 多种测试方法已获监管部门认可并提交至 MHLW，但部分已验证方法仍未被 OECD TG 计划接受。
结论
除 OECD 外，其他国际组织对非动物测试方法需求不断增加。日本有望凭借更多方法，为全球全身毒性测试新方法的发展贡献力量，推动生命科学和健康医学领域的进步。
