长期体外暴露于洗必泰或三氯生诱导光滑念珠菌对唑类药物交叉耐药性的机制研究

本研究针对临床常用消毒剂可能诱导真菌耐药性的关键问题，通过建立高通量体外耐药模型，首次揭示洗必泰(CHX)和三氯生(TRC)长期暴露会促使光滑念珠菌(N. glabratus)产生唑类交叉耐药性，而奥替尼啶(OCT)无此效应。研究人员通过全基因组测序发现PDR1和PMA1基因突变是耐药性产生的主要机制，该发现为医院感染防控中消毒剂选择提供了重要依据。

　　

在真菌感染日益成为全球健康威胁的背景下，医院获得性念珠菌感染对免疫缺陷患者尤为危险。随着唑类等抗真菌药物耐药性不断加剧，世界卫生组织(WHO)已将耐药真菌列入优先病原体清单。消毒剂作为医院感染防控的关键手段，其长期使用是否会像抗生素一样诱导耐药性，成为亟待解答的科学问题。更令人担忧的是，细菌研究中已发现消毒剂与抗生素交叉耐药现象，但这一机制在真菌领域尚未阐明。

维也纳医科大学临床微生物学部的研究团队在《Antimicrobial Resistance》发表重要成果。为解决消毒剂选择性压力是否导致真菌耐药这一核心问题，研究人员建立创新性高通量体外耐药模型，对96株临床分离的白色念珠菌(C. albicans)和光滑念珠菌(N. glabratus)进行长达60天的消毒剂暴露实验。通过EUCAST标准药敏试验、全基因组测序(WGS)和基因表达分析等技术，系统评估了洗必泰(CHX)、三氯生(TRC)和奥替尼啶(OCT)三种消毒剂的耐药诱导潜力。

研究方法

研究采用临床分离株与标准菌株(CBS138和SC5314)平行实验，通过改良EUCAST方案测定消毒剂最低抑菌浓度(MIC)。创新设计96孔板连续传代系统，以梯度浓度递增方式模拟长期暴露。通过比较暴露前后MIC变化(≥8倍定义为耐药)，筛选耐药菌株进行WGS分析。采用RT-qPCR检测药物外排泵基因CDR1表达量，验证突变功能。

消毒剂敏感性特征

初始药敏显示OCT抗菌活性最强(MIC₅₀=0.5 mg/L)，显著优于CHX和TRC(MIC₅₀=8 mg/L)。

交叉耐药性发现

长期暴露后，50株N. glabratus对唑类药物产生交叉耐药：

• 39株(40.6%)经TRC暴露后对氟康唑(FLC)等5种唑类耐药

• 11株(11.4%)经CHX暴露出现类似表型

  耐药菌株对唑类MIC提升4-512倍，且撤药后表型稳定

分子机制解析

WGS揭示两类关键突变：

1. PDR1转录因子突变：D261Y等6个位点突变导致药物外排泵(CDR1/2p)过表达(中位数21倍)

2. PMA1质子泵突变：T215I等7个位点变异可能通过细胞内酸化(降低pH)和协同CDR1过表达(中位数33.3倍)共同介导耐药

结论与意义

该研究首次证实CHX和TRC(非OCT)在体外可诱导N. glabratus唑类交叉耐药，揭示PDR1/PMA1双通路机制。尽管未发现消毒剂自身耐药性，但该发现对医院消毒策略具有警示意义：

1. 为WHO真菌防控清单提供新证据，提示需监测消毒剂选择性压力

2. OCT因其独特物理作用机制(不诱导耐药)或成为更优选择

3. 建立的高通量模型为抗真菌耐药研究提供新工具

这项研究将细菌中已知的"消毒剂-抗生素"交叉耐药现象拓展至真菌领域，为医院感染控制中消毒剂的合理使用提供了重要科学依据。未来需进一步验证这些发现在临床环境中的相关性，并探索PMA1突变导致CDR1过表达的精确调控机制。