基于胶束增强天然荧光的Pirtobrutinib绿色分析方法开发及其在生物样本与制剂定量中的应用研究

《Journal of Fluorescence》：First Fluorescence Method for Native Quantification of Pirtobrutinib Used for Treatment of Cancer in its Market Form and Biological Fluids; Application of Greenness

本期推荐一种创新荧光分析策略：针对BTK抑制剂Pirtobrutinib（PIR）在复发/难治性套细胞淋巴瘤治疗中的剂量监控难题，研究团队开发了首个基于十二烷基硫酸钠（SDS）胶束增强天然荧光的定量方法。该方法在λex=320 nm/λem=380 nm条件下实现30-1000 ng mL-1线性检测（LOD=8.66 ng mL-1），成功应用于人血浆及市售制剂分析，并通过GAPI/AGREE评估证实其绿色环保特性，为抗癌药物监测提供了高灵敏度、低成本的分析方案。

　　

在精准医疗时代，抗癌药物的治疗窗监控至关重要。Pirtobrutinib（商品名Jaypirca）作为新型非共价布鲁顿酪氨酸激酶（Bruton's tyrosine kinase, BTK）抑制剂，于2023年先后获美国FDA与欧盟批准用于复发/难治性套细胞淋巴瘤（MCL）及慢性淋巴细胞白血病（CLL）的治疗。然而，该药物存在个体差异大、常见不良反应（如出血、感染等）的特点，且现有分析方法多依赖高效液相色谱（HPLC）等耗时耗材的技术，难以满足临床快速监测与绿色环保的双重需求。目前文献中尚未建立基于天然荧光的Pirtobrutinib定量方法，尤其在复杂生物基质中的检测灵敏度与操作便捷性存在明显短板。

为解决这一难题，Deraya大学药学系Hesham Salem团队在《Journal of Fluorescence》发表研究，首次开发了基于胶束增强荧光的光谱分析法。该方法巧妙利用阴离子表面活性剂十二烷基硫酸钠（SDS）形成胶束，将Pirtobrutinib的天然荧光强度提升200%，实现了无需复杂前处理的快速定量。

关键技术方法概述

研究通过优化缓冲体系（pH 6醋酸缓冲液）、SDS浓度（10 mM）及反应时间（10分钟）建立最佳荧光检测条件。方法验证遵循ICH Q2(R1)指南，在线性范围（30-1000 ng mL^-1）、检测限（LOD=8.66 ng mL^-1）、定量限（LOQ=26.23 ng mL^-1）及精密度（RSD<2%）等参数均达到标准。实际应用部分采用乙腈沉淀蛋白处理人血浆样本（来源：Minia大学医院健康志愿者），并对市售Jaypirca?片剂进行检测，通过t检验/F检验验证与参考方法无显著差异。

研究结果

优化变量

通过系统筛选发现，pH 6醋酸缓冲液与1 mL SDS（10 mM）组合可最大化荧光响应值。

显示SDS的胶束包封效果显著优于Tween 80，而蒸馏水作为稀释溶剂时信号稳定性最高。时间曲线证实荧光强度在反应10分钟后趋于稳定，满足快速检测需求。

方法验证

校准曲线呈现优异线性（r=0.9999），不同浓度水平回收率在99.32%-100.99%之间，日内/日间精密度RSD均低于1.5%。

直观对比了SDS对荧光信号的增强作用及血浆基质中的检测特异性。稳健性测试表明，缓冲液pH（5.5-6.5）、SDS体积（0.75-1.25 mL）及反应时间（5-15分钟）的微小波动不影响结果可靠性。

实际应用

在药品制剂分析中，方法成功规避辅料干扰，回收率与参考色谱法高度一致（t=0.98, F=1.99）。血浆加标实验显示回收率达96.36%-97.99%，证实其在复杂生物样本中的适用性。

绿色性评估

通过GAPI与AGREE（得分0.86-0.92）工具量化环保性能，结果显示该方法除血浆前处理需少量乙腈外，整体符合绿色分析化学原则，尤其适用于制药质控场景。

结论与意义

本研究建立的SDS-荧光分析法突破了传统色谱技术的局限性，首次实现Pirtobrutinib在生物流体及制剂中的高灵敏度、低成本定量。该方法无需衍生化处理，操作流程简化，在30分钟内即可完成检测，为BTK抑制剂的治疗药物监测（TDM）提供了实用工具。其绿色评估优势进一步契合可持续发展需求，有望推广至其他荧光性抗癌药物的分析平台构建。未来研究可探索该方法在临床药代动力学研究及耐药机制探索中的应用潜力。