芦丁对从一种未被研究过的物种——Miliusa tomentosa (Roxb.) J. Sinclair 中分离出的 HepG2 细胞的体外肝保护作用

《Next Research》：In vitro hepatoprotective effects of rutin on HepG2 cells, isolated from an unexplored species: Miliusa tomentosa (Roxb.) J. Sinclair

本研究通过制备HPLC从Miliusa tomentosa叶中分离出纯度87.53%的槲皮素（rutin），并验证其肝保护作用，证实该化合物可逆转对乙酰氨基酚诱导的肝细胞损伤。

　　

Inchara Moodbagil C|Meghana P|Sandeep Kumar Jain R|Prashanth N|Sharath R|N.D. Satyanarayana|Manjunatha B|Raja Naika H|Savinaya MS|Riaz Mahmood|Kumaraswamy HM

印度卡纳塔克邦Shankarghatta市Kuvempu大学生物技术研究生研究与学习系实验医学实验室，邮编577451

摘要

Miliusa tomentosa（Roxb.）J. Sinclair是一种传统的野生药用植物，主要被印度某些部落社区用作民间疗法来治疗多种疾病。为了科学验证其疗效，本研究利用M. tomentosa的叶子提取活性成分并评估其护肝作用。通过制备型高效液相色谱（preparative-HPLC）技术，分离出一种纯度为87.53%、产率为100mg/g的植物化合物。光谱分析显示，芦丁（rutin）是M. tomentosa叶子中的主要成分。在护肝实验中，阿司匹林（15mM）处理会导致HepG2细胞活力下降、凋亡细胞增加及活性氧（ROS）活性增强，但当同时给予100和200μM的芦丁时，这些现象得到了缓解。因此，可以推断芦丁能够保护肝细胞免受阿司匹林的损伤，并帮助细胞恢复正常功能。这是首次从Miliusa tomentosa中分离出芦丁的报道。

引言

自古以来，人们就认识到植物的药用价值，并将其用于治疗各种疾病[46]。植物不仅在医药领域发挥了重要作用，还帮助发现了具有药理活性的化合物[14]。鉴于植物具有丰富的抗氧化特性和护肝功效[44]，近年来人们越来越关注从天然资源中开发新型化合物，以规避传统方法的局限性。因此，本研究选择了传统上备受推崇的Miliusa tomentosa，这种植物在西高止山脉的马拉巴尔海岸地区属于特有且濒危物种[25]。Miliusa tomentosa含有多种稀有植物成分，如Miliusanones、Miliusanes、黄酮类和三萜类化合物[45]。这种属于番荔枝科（Annonaceae）的大型落叶树广泛分布于印度、尼泊尔和斯里兰卡。在印度，它有多种地方名称，如Kaladri、Hessare、Heccara（卡纳达语）、Dom-sal（印地语）、Kanakaitha（马拉雅拉姆语）、Humb（马拉地语）、Perivuvav（泰米尔语）、Umbh（古吉拉特语）、Pedda chiluka dudduga（泰卢固语）。其树皮呈棕黑色，带有纵向裂纹，厚度为15-25毫米；嫩枝表面覆盖绒毛，叶子呈两列排列。这种野生植物结出鲜艳的紫色果实和花朵[37]。

尽管针对Miliusa tomentosa的科学研究尚不充分，但根据印度不同部落的传统知识，该植物有多种用途：安得拉邦Adilabad地区的Gonds部落每周三次使用其叶子提取物作为头膏[36]；博帕尔地区的村民用其叶子和根来缓解便秘[10]；中央邦Jhabua地区则用叶糊治疗皮肤疾病[49]；拉贾斯坦邦Kota地区则用其叶子治疗呼吸系统疾病[35]。Sariska老虎保护区（拉贾斯坦邦）的部落居民在夏季食用新鲜野生果实以增强体力[28]。Umberto Quattrocchi在《CRC世界药用与有毒植物词典》中记载，该植物的果实汁液具有利尿作用，树皮煎剂可用于漱口治疗口腔溃疡，茎皮糊可用于治疗瘫痪，叶糊可用于伤口处理[40]。此外，M. tomentosa的根还被用来促进动物产奶[29]。因此，在这些传统知识从部落社会中消失之前，记录和传承这些独特的医疗遗产至关重要。Miliusa tomentosa的形态特征如图1所示。

肝脏是人体最重要的器官，承担着血浆蛋白合成、异生物质代谢、糖原储存和解毒等多种功能。作为循环系统的核心器官，长期接触毒素会严重损害肝脏[44,50]。根据世界胃肠病学组织的数据，慢性肝病是导致消化系统疾病死亡的第二大原因[44,50]。对乙酰氨基酚（acetaminophen）这种常用的解热镇痛药虽然通常被认为是安全的，但过量使用会损害肝脏功能，最终导致药物性肝损伤，这是急性肝损伤的常见原因，甚至可能引发严重的肝坏死或死亡[13]。

据我们所知，这是首次报道从M. tomentosa中分离出植物化合物并评估其护肝效果的研究，内容包括植物化学成分的筛选、分离、表征以及该化合物对阿司匹林处理后的HepG2细胞系的护肝效果评估。

化学试剂

本研究使用了分析级试剂、化学物质和溶剂。乙醇（ethanol）、DMSO、FBS、MTT和Trypsin购自Mumbai的Hi Media Laboratories；H₂DCFDA和标准化合物水飞蓟素（silymarin）购自美国Sigma公司。

植物材料的采集、鉴定与验证

2020年3月，我们在印度卡纳塔克邦Shankaraghatta采集了Miliusa tomentosa的叶子，并将其保存在Kuvempu大学生物信息学与生物技术系的标本馆中。

结果与讨论

Miliusa tomentosa叶子的乙醇提取物产率为16.2%。从天然资源中提取植物化合物的产率和纯度取决于具体的提取方法。这些方法需要满足成本效益、易用性、适用性、效率等要求，并能保留植物中的活性成分[20]。传统上，人们使用了多种溶剂进行提取实验。

结论

本研究旨在验证传统上被用作药材的Miliusa tomentosa的疗效。事实上，这是首次通过制备型高效液相色谱等技术从M. tomentosa叶子中分离出芦丁（rutin）的科学研究。结果表明，黄酮类化合物是M. tomentosa叶子乙醇提取物中含量最丰富的成分。

未引用参考文献

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伦理声明

本研究未涉及任何动物实验。

参与者说明

本研究未涉及任何人类参与者。

出版许可

作者声明本研究未涉及任何参与者。

资金情况

作者声明在撰写本手稿过程中未获得任何资金、资助或其他形式的支持。

数据与材料的获取

本研究的数据将由通讯作者提供。

作者贡献声明

Inchara Moodbagil C：正式数据分析、实验设计、方法论制定、初稿撰写及修订。

Meghana P：实验设计、方法论验证、修订与编辑。

Sandeep Kumar Jain R：数据整理、方法论制定。

Prashanth N：方法论设计。

Sharath R：正式数据分析。

N.D. Satyanarayana：数据整理、正式数据分析。Manjunatha B：数据整理。Raja Naika H：正式数据分析。Savinaya MS：实验设计。Riaz Mahmood：研究指导、结果验证及修订。

利益冲突声明

作者声明不存在可能影响本研究结果的财务利益或个人关系。