单体C反应蛋白作为炎症性疾病的治疗靶点

《RMD Open》：Monomeric C-reactive protein as a therapeutic target in inflammatory diseases

C反应蛋白（CRP）的异构体pCRP和mCRP在炎症中具有不同功能：mCRP通过激活内皮细胞、白细胞和血小板介导炎症，而pCRP无此活性。本研究证实抗mCRP单抗3C能减轻LCWE诱导的Kawasaki病样血管炎小鼠模型的主动脉炎，但需进一步验证pCRP的作用及炎症评估方法。

　　

C-反应蛋白（CRP）是由肝脏在炎症反应中产生的。CRP合成的刺激主要来源于促炎细胞因子，尤其是IL-6，以及在一定程度上来自IL-1和肿瘤坏死因子α（TNF-α）。1 2 因此，CRP被用作临床上的炎症标志物。CRP是一种动态蛋白质，具有多种构象状态，包括天然五聚体CRP（pCRP）、对称五聚体形式（pCRP*）和单体CRP形式（mCRP）。1 2 pCRP可以通过pCRP*解离为mCRP。pCRP通过与磷脂酰胆碱的相互作用结合到细胞表面，结合后的pCRP会发生构象变化，从而解离为mCRP。出于临床目的，通常测量的是pCRP而不是mCRP。1 2 pCRP本身没有炎症活性。3 相反，mCRP通过激活内皮细胞、白细胞和血小板（通过NF-κβ调控的蛋白质翻译，例如IL-6、IL-8、MCP1）以及补体途径来发挥促炎作用。1 2 这种功能差异可以通过两种异构体与不同类型的Fcγ受体结合来解释：mCRP与中性粒细胞上的低亲和力免疫复合物结合免疫球蛋白G（IgG）受体FcγRIIIb（CD16b）和单核细胞上的FcγRIIIa（CD16a）结合，而pCRP则与低亲和力IgG受体FcγRIIa（CD32）结合（3 Khreiss T）。因此，mCRP可能是治疗炎症性疾病的潜在靶点。在我们之前的研究中，我们生成了抗mCRP单克隆抗体以开发抗mCRP疗法。克隆3C能够特异性识别mCRP而不识别pCRP。4 抗mCRP单克隆抗体3C在小鼠模型中抑制了关节炎和狼疮性肾炎。4 在本研究中，我们评估了抗mCRP单克隆抗体3C是否能够减轻由干酪乳杆菌细胞壁提取物（LCWE）诱导的类似川崎病的血管炎小鼠模型中的主动脉炎，这是一种成熟的血管炎动物模型。5–7 在LCWE小鼠模型中，单次腹腔注射LCWE就足以引发主动脉根部和/或冠状动脉炎症。5–7

我们发现抗mCRP单克隆抗体3C能够减轻LCWE诱导的类似川崎病的血管炎小鼠模型中的主动脉炎。具体来说，小鼠被腹腔注射1000 μg的LCWE（n=14）或PBS（n=7）以诱导主动脉炎。两周后，LCWE处理的小鼠被分为两组，一组每周接受IgG（n=7）注射，另一组接受抗mCRP单克隆抗体（3C）注射（n=7），持续4周。LCWE诱导血管炎的小鼠主动脉根部的炎症细胞浸润程度比PBS处理的小鼠更严重（p<0.05）（图1）。图1中还展示了LCWE诱导的主动脉炎的代表性显微照片。IgG治疗对主动脉炎没有影响（在线补充材料）。实验方法在在线补充材料中有详细描述。

图1

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mAb-3C对LCWE诱导的血管炎的影响。小鼠被腹腔注射PBS（n=7）或LCWE（n=14）。两周后，LCWE处理的小鼠进一步分为两组：一组不接受治疗（LCWE+IgG，n=7），另一组接受mAb-3C治疗（LCWE+mAb-3C，n=7）。所有小鼠在LCWE或PBS注射后14周被处死。代表性照片显示了用H&E染色处理的主动脉病变横截面。对PBS（n=7）、LCWE+IgG（n=7）或LCWE+mAb-3C（n=7）处理的小鼠的主动脉炎症程度进行了半定量评估。数值以平均值±标准差表示，*p<0.05。LVWE为干酪乳杆菌细胞壁提取物。

在本研究中，我们发现抗mCRP单克隆抗体3C能够减轻LCWE诱导的血管炎小鼠模型中的主动脉炎。直接针对mCRP可能具有治疗潜力。然而，我们尚未使用标记浸润免疫细胞（如CD45）的免疫组化（IHC）技术在组织样本中评估血管炎症的严重程度。需要更客观地评估治疗效果以增强数据可靠性。此外，本研究中也未使用抗五聚体CRP抗体进行对照实验。因此，目前尚不清楚是否只有CRP的单体异构体与炎症（如血管炎）有关。一些使用抗五聚体CRP抗体的实验可能有助于进一步了解mCRP和/或pCRP的作用。8 数据尚处于初步阶段，需要在更大规模的研究中加以验证。