依折麦布通过NRF2介导的炎症和氧化应激抑制作用，减轻糖尿病视网膜病变

《Journal of Diabetes and its Complications》：Ezetimibe attenuates diabetic retinopathy via NRF2-mediated suppression of inflammation and oxidative stress

Ezetimibe通过激活NRF2通路减轻糖尿病视网膜病变中的氧化应激和炎症反应，为治疗提供新策略。

　　

雷成|单成|冉竹|徐国旭

中国江苏省苏州市苏州大学第二附属医院眼科

摘要

背景

糖尿病视网膜病变（DR）是工作年龄成人失明的主要原因，其发病机制与慢性炎症和氧化应激密切相关。降脂药物依折麦布（EZE）已被证明能激活NRF2通路，但其在DR中的作用尚未得到充分研究。本研究通过体外和体内模型探讨了EZE对糖尿病视网膜病变的保护作用。

方法

ARPE-19细胞在含有或不含有EZE（5–20 μM）和/或ML385（NRF2抑制剂）的高葡萄糖（HG，25 mM）环境下进行培养。通过Western blot、免疫荧光分析、qPCR和流式细胞术检测NRF2的核转位、线粒体ROS（mtROS）及炎症介质的变化。在体内实验中，使用链脲佐菌素诱导的野生型（WT）和NRF2敲除（Nrf2 KO）小鼠，每天给予EZE（2或10 mg/kg）治疗4周，然后通过Western blot、H&E染色和免疫组化方法评估视网膜炎症和结构完整性。

结果

EZE以剂量依赖的方式促进NRF2的核转位，并降低HG诱导的mtROS、NF-κB激活以及TNF-α、IL-6、MCP-1、COX-2、iNOS和VEGFA在ARPE-19细胞中的表达。这些效应可被ML385阻断。在WT糖尿病小鼠中，EZE能够改善空腹血糖，维持视网膜层厚度，并减轻视网膜炎症；而在Nrf2 KO小鼠中则未观察到保护作用。

结论

EZE通过NRF2介导的抗氧化应激和抗炎机制发挥视网膜保护作用。这些发现支持将EZE重新用于治疗糖尿病视网膜病变的潜力。

引言

糖尿病视网膜病变（DR）是糖尿病最常见的严重微血管并发症之一，是全球工作年龄成人失明的主要原因。

从糖尿病（DM）发展到DR的过程中，慢性高血糖、炎症和氧化应激之间存在复杂的相互作用。

慢性高血糖会引发一系列病理变化，包括晚期糖基化终产物（AGEs）的形成和多元醇途径的激活，这两者都会加剧氧化应激。氧化应激表现为活性氧（ROS）水平升高和抗氧化能力下降，导致视网膜线粒体功能障碍和细胞损伤。同时，炎症通过NF-κB等信号通路的激活而被引发，这些通路会上调TNF-α、IL-6和IL-1β等促炎因子的表达。

目前糖尿病视网膜病变的治疗手段（如抗血管内皮生长因子疗法、皮质类固醇和激光光凝）主要针对新生血管形成和水肿。然而，这些方法往往无法有效解决根本的炎症和氧化应激问题。尽管抗VEGF疗法在缓解黄斑水肿和新生血管方面有一定效果，但主要是对症治疗，且主要适用于疾病晚期。

依折麦布（EZE）作为一种成熟的肠道胆固醇吸收抑制剂，近年被发现具有多方面的抗炎和抗氧化特性。最新研究表明，EZE能够激活核因子红系2相关因子2（NRF2）通路，该通路是细胞抗氧化反应的关键调节因子，有助于减轻氧化应激。EZE还能调节晚期糖基化终产物（AGEs）并抑制AGE-RAGE信号通路，其作用可能超越单纯的降脂效果。然而，EZE在糖尿病视网膜病变（DR）中的具体作用机制仍需进一步研究。

本研究探讨了EZE是否能够减轻糖尿病视网膜病变中的视网膜损伤，重点关注其通过Nrf2通路缓解炎症和氧化应激的作用。我们通过体外和体内实验模型进行了验证。与主要针对并发症的抗血管内皮生长因子疗法不同，EZE有可能干预疾病进程，从源头上抑制导致DR进展的炎症和氧化应激反应。EZE是一种成熟且耐受性良好的药物，临床应用安全性已得到证实。此外，多项研究显示2型糖尿病（T2DM）患者中常有脂质代谢紊乱，因此脂质管理对糖尿病治疗至关重要。利用EZE的抗炎和抗氧化特性，有望为DR提供更安全、更有效的治疗方案，可能缩短新药研发周期。

材料

ARPE-19细胞购自武汉普瑞赛拉生物科技有限公司；Dulbecco改良Eagle培养基/因子12（DMEM/F12）购自杭州吉诺生物科技有限公司；胎牛血清购自GIBCO（美国密苏里州圣路易斯）。实时定量聚合酶链反应（qPCR）试剂盒和逆转录试剂盒购自Takara Bio公司；STZ、d-葡萄糖和甘露醇购自上海桑贡生物科技有限公司。

EZE对ARPE-19细胞存活率的影响

为评估EZE的作用，将ARPE-19细胞分别与不同浓度的EZE（0、5、10、15、20、30、40、50、80和160 μM）共培养24和48小时，随后使用CCK-8检测细胞毒性。如图1a和b所示，EZE浓度在0–40 μM范围内对细胞存活率无显著影响，因此选择5、10和20 μM的EZE用于后续实验。

EZE激活ARPE-19细胞中的Nrf2蛋白

为了验证EZE对Nrf2的激活作用...

讨论

本研究证实Nrf2是EZE发挥视网膜保护作用的关键因素。基因敲除Nrf2会完全消除EZE的治疗效果，包括减轻视网膜炎症、氧化应激和结构变薄，这为EZE的作用提供了有力的体内证据。虽然Nrf2-KO模型本身不能...

结论

本研究展示了EZE作为糖尿病视网膜病变创新治疗剂的潜力，为疾病管理提供了全面策略。未来需要进一步研究以明确其作用机制并优化其临床应用。

作者贡献声明

雷成：撰写初稿、数据可视化、数据分析、概念构建。单成：数据可视化、实验设计。冉竹：数据管理。徐国旭：撰写、审稿和监督。

利益冲突声明

作者声明无利益冲突。本文内容及撰写由作者独立完成。