综述：克服CAR-NK免疫疗法中的障碍：CRISPR技术在检查点编辑和异体细胞设计方面的进展

《Functional & Integrative Genomics》：Overcoming barriers in CAR-NK immunotherapy: CRISPR-Driven advances in checkpoint editing and allogeneic design

CRISPR/Cas9基因编辑技术显著推动了CAR-NK细胞疗法的进步，通过敲除免疫抑制基因（如CISH、PD-1、TGFBR2）和敲入CAR结构域优化其抗肿瘤活性，同时利用IL-15/IL-12增强NK细胞持久性，敲除NKG2A/TIGIT等免疫抑制分子促进肿瘤浸润，为解决实体瘤治疗难题和开发异体疗法奠定基础。

　　

摘要

嵌合抗原受体（CAR）工程化的自然杀伤（NK）细胞因对恶性细胞具有强大的细胞毒性，且比传统T细胞疗法具有更低的移植物抗宿主病（GvHD）风险，正成为癌症免疫治疗中一个令人兴奋的研究方向。CRISPR/Cas9基因组编辑新技术显著加速了CAR-NK细胞的工程化进程，使得对这些细胞进行简单、多重且精确的改造成为可能，从而提升了其疗效、持久性和对肿瘤的特异性。本文重点探讨了CRISPR技术在CAR-NK细胞开发中的应用，包括敲除抑制性检查点基因（CISH、PD-1和TGFBR2），将CAR基因插入安全的基因组位置，以及对CAR-NK细胞进行多重编辑以增强其对癌症的细胞毒性并抵抗肿瘤微环境（TME）的抑制作用。我们还研究了通过敲入IL-15或IL-12来增强NK细胞的免疫细胞因子防御能力，以确保其长期增殖和存活，并探讨了利用CRISPR技术敲除NKG2A和TIGIT等免疫抑制因子，以规避肿瘤用于逃避免疫攻击的机制。此外，CRISPR技术介导的归巢受体上调能够增强NK细胞对肿瘤的浸润能力，这有助于克服治疗实体瘤时的主要障碍。值得一提的是，开发现成产品方面也取得了进展，这是推动异体疗法发展的重要步骤。尽管已经取得了实质性进展，但在优化CRISPR递送方式、减少脱靶效应以及提高体内持久性方面仍存在挑战。未来的CAR-NK研究方向可能会利用下一代基因组编辑工具和合成生物学技术，开发出可调性和逻辑控制的CAR-NK细胞。总体而言，本文展示了将CRISPR技术与CAR-NK免疫疗法相结合的革命性潜力，有望开发出针对血液系统恶性肿瘤和实体瘤的下一代可编程且高效的治疗方法。