男性儿童患者硬化性苔藓的病理组织学特征及miRNAs的差异表达

《Andrology》：Histopathological Characterization and Differential Expression of miRNAs in Male Pediatric Patients With Lichen Sclerosus

儿童男性银屑病性皮肤硬化症病理形态学与miRNA表达研究。通过组织学分类四组（lichenoid炎症、band-like淋巴浸润、混合炎症、淋巴耗尽），发现miR-146a/146b/150/155显著上调，miR-199b/200b/30b显著下调，提示miRNA可作为诊断标志和潜在治疗靶点。

　　
儿童男性白斑病（lichen sclerosus，LS）的病理形态学与微RNA表达特征研究

1. 研究背景与意义
白斑病是一种慢性炎症性皮肤病变，常见于外生殖器区域。尽管该病在成人患者中已有较为系统的病理分类标准，但在儿童男性患者中缺乏统一诊断依据。本研究通过病理形态学分析结合微RNA表达谱研究，旨在建立儿童男性白斑病的分类体系，并探索其分子生物学特征，为早期诊断和靶向治疗提供依据。

2. 研究对象与方法
研究纳入98例儿童男性包皮切除标本，其中41例确诊为白斑病。采用经验丰富的泌尿病理学家（Ah）进行双盲病理评估，将标本分为四类：
- 第一类：基底性淋巴浸润（伴基底 vacuoles）
- 第二类：真皮乳突层带状淋巴浸润（伴纤维化）
- 第三类：混合性炎症模式
- 第四类：淋巴耗竭型（纤维化为主）

炎症程度采用三级分类：
- 弱炎症（表皮正常，真皮轻微淋巴细胞浸润）
- 中度炎症（表皮轻微萎缩，真皮明显淋巴细胞浸润）
- 强炎症（表皮显著萎缩，真皮广泛纤维化）

研究采用qRT-PCR技术检测9种miRNA表达水平，包括：
- 上调：miR-146a、miR-146b、miR-150、miR-155
- 下调：miR-30b、miR-199b、miR-200b、miR-455

样本处理流程：
1. 组织样本来源：来自埃尔兰根大学医学中心病理档案
2. RNA提取：采用FFPE组织专用提取试剂盒（Promega）
3. 定量分析：使用Applied Biosystems QuantStudio 3系统
4. 数据校正：采用SNORD44和U6 snRNA作为内参

3. 研究结果
3.1 病理形态学特征
四类病理亚型中，第二类（带状淋巴浸润）占比最高（51.2%），其次为第一类（31.7%）。第四类（淋巴耗竭型）仅占9.8%。炎症程度与病理亚型存在显著相关性（p=0.019），其中带状浸润组（第二类）和混合炎症组（第三类）多表现为中到重度炎症。

3.2 微RNA表达谱分析
（1）差异表达miRNA
与正常组织相比，白斑病组织显著上调miR-146a、miR-146b、miR-150、miR-155（p<0.001），其中miR-155的AUC值达0.892，具有最佳区分度。显著下调的miRNA包括miR-30b、miR-199b、miR-200b（p<0.001）。

（2）年龄相关性表达
≤9岁患者中，miR-150表达量显著高于>9岁组（p=0.049）。该组同时表现为更强的炎症反应（p=0.020），可能与青春期激素变化相关。

（3）miRNA与病理特征关联
- miR-146a：与炎症强度正相关（p=0.026）
- miR-199b：随炎症程度加重而表达下降（p=0.017）
- miR-30b：在非白斑对照组中表达最低（p=0.001）

3.3 免疫组化学验证
granzyme B（细胞毒性T细胞/NK细胞标志物）表达呈现梯度变化：
- 混合炎症组（第三类）表达最强
- 带状浸润组（第二类）次之
- 基底炎症组（第一类）较弱
- 淋巴耗竭组（第四类）无表达

该结果与miR-199b的下调趋势一致（miR-199b负调控granzyme B表达）。

4. 研究讨论
4.1 病理分型体系创新
提出的四类病理分型（基底炎症→带状浸润→混合炎症→纤维化）为儿童患者提供了更精细的评估标准。数据显示：
- 炎症强度：强＞中＞弱（39.0%＞34.1%＞26.8%）
- 年龄相关性：年轻组（≤9岁）以强炎症为主（47.6%），而老年组（>9岁）中 moderate炎症占比55.0%

4.2 微RNA生物标志物
（1）诊断标志物组合：
- 单标志物：miR-155（AUC=0.892）
- 组合标志物：miR-155+miR-150（AUC=0.906）

（2）治疗靶点潜力：
- miR-155：激活NF-κB通路，抑制SOCS家族蛋白表达
- miR-150：调控粒单细胞分化，影响IL-6信号通路
- miR-30b：与细胞凋亡相关，已发现其与胰腺癌预后相关

（3）年龄特异性差异：
≤9岁患者中，miR-150表达量比>9岁组高21.7%（p=0.049），提示青春期前后的免疫微环境存在显著差异。

4.3 临床意义与展望
（1）诊断应用：
- miR-155检测可达到89.2%的灵敏度（AUC=0.892）
- 组合检测（miR-155+150）将AUC提升至0.906
- 提出的四类病理分型与炎症强度分级系统可指导临床分期

（2）治疗方向：
- 靶向抑制miR-155（如已获批的CTCL疗法）
- 激活miR-30b可能具有抗纤维化作用
- 需要开发特异性miRNA靶向药物（如LNA反义寡核苷酸）

（3）研究局限：
- 样本量限制（n=41）
- 未包含非典型病理亚型
- 需要扩大队列进行多中心验证

5. 结论
本研究建立了儿童男性白斑病的四分类病理体系，并发现：
1. miR-155和miR-150构成高特异性诊断标志物组合
2. 炎症程度与病理亚型存在显著关联（p=0.019）
3. 青春期前后的miRNA表达谱存在年龄特异性差异
4. granzyme B表达梯度与炎症程度呈正相关

这些发现为儿童白斑病的早期诊断提供了分子依据，同时为靶向抗炎治疗（如miR-155抑制剂）和免疫调节治疗（如miR-30b激活剂）提供了潜在方向。建议后续研究扩大样本量，纳入青春期不同发育阶段患者，并开展动物模型验证。

注：本研究通过整合病理形态学与分子诊断技术，首次系统揭示了儿童男性白斑病的病理异质性特征及其对应的miRNA表达谱。研究建立的分类体系（表1）和标志物组合（表2）为临床实践提供了新参考标准，同时为开发基于微RNA的靶向疗法奠定了理论基础。