棘球绦虫抗原B在体外具有清除脂多糖（LPS）的作用，从而阻止树突状细胞通过TLR4途径被激活

宿主包虫囊蚴分泌的抗原B（EgAgB）是一种脂蛋白，可显著抑制脂多糖（LPS）诱导的骨髓来源树突状细胞（BMDC）炎症反应，其机制包括EgAgB与LPS结合，干扰TLR4信号通路中的二聚化和内吞作用，同时EgAgB自身可轻微激活BMDC。动态光散射和ELISA-like实验证实EgAgB8/1亚基具有高亲和力结合LPS的界面，且其效果优于人类高密度脂蛋白（hHDL）。研究为包虫病免疫调控提供了新机制。

　　
Echinococcus granulosus sensu lato抗原B（EgAgB）是一种由包虫幼虫分泌的寄生虫脂蛋白，广泛存在于包虫囊液（HF）中。近年来，学者们发现EgAgB具有免疫调节功能，能够抑制宿主对脂多糖（LPS）等病原相关分子模式（PAMPs）的过度炎症反应。然而，其作用机制尚不明确。本研究通过原代EgAgB（nEgAgB）和重组EgAgB8/1（rEgAgB）对骨髓来源的树突状细胞（BMDC）的影响，结合分子动力学模拟和功能实验，揭示了EgAgB通过捕获并干扰LPS与TLR4/MD2复合物的结合，抑制炎症信号通路的关键作用。

### 研究背景与核心问题
包虫幼虫在宿主体内形成囊肿，长期逃避宿主免疫清除。其分泌的EgAgB作为主要外源性蛋白，曾被证实能抑制中性粒细胞、单核细胞和树突状细胞的过度活化。然而，EgAgB的免疫调节机制存在两种可能解释：一是其本身直接激活免疫细胞；二是其携带微量LPS作为内源激活剂。此外，人类高密度脂蛋白（hHDL）已被证实可通过结合LPS发挥类似作用，但EgAgB与hHDL在功能特性和分子机制上存在显著差异。本研究聚焦以下问题：
1. **EgAgB是否通过结合LPS发挥免疫调节作用**；
2. **EgAgB与hHDL在LPS结合能力及信号干扰效果上的差异**；
3. **EgAgB对TLR4信号通路的干预机制**。

### 关键实验设计与发现
#### 1. EgAgB对BMDC的激活与抑制效应
实验发现，纯化的nEgAgB和rEgAgB在无LPS刺激时能诱导BMDC分泌少量IL-6和IL-12p40，但无法激活干扰素-β（IFN-β）。这一矛盾现象提示EgAgB可能携带微量LPS。通过聚肌胞苷酸（PAM）刺激验证，证实EgAgB的激活效应依赖于LPS污染，而非自身结构。

#### 2. LPS残留的验证与消除
通过聚合离子交换层析和脱盐柱纯化，nEgAgB的LPS残留量被控制在0.02-0.09 EU/mg蛋白。使用聚多卡辛B（PB）预处理样品，发现PB可将EgAgB诱导的IL-6分泌抑制50%-70%，但无法完全消除。这表明EgAgB可能通过物理包裹或结合LPS的方式增强其生物利用度，而非单纯依赖游离LPS。

#### 3. TLR4依赖性激活的分子机制
在TLR4缺陷小鼠的BMDC中，EgAgB的促炎效应被完全消除，而hHDL的LPS结合能力未受影响。流式细胞术显示，LPS刺激BMDC时，CD14（LPS/MD2共受体）和总TLR4表达量均上调，而EgAgB显著抑制了LPS诱导的CD14表达（降低幅度达40%-60%），并阻断TLR4二聚化和内吞作用。

#### 4. EgAgB与HDL的竞争性LPS结合
通过竞争性结合实验发现，EgAgB（200 μg/mL）可降低LPS与THP-1巨噬细胞的结合率至23%，显著优于hHDL（抑制率约10%）。动态光散射（DLS）显示，EgAgB与LPS结合后形成更大的复合颗粒（平均直径从13.4 nm增至18.7 nm），而hHDL仅发生轻微尺寸变化。

#### 5. 分子互作与结构解析
基于AlphaFold预测的EgAgB8/1三维结构，结合HADDOCK分子对接模拟，发现其N端区域（包含Arg66、Arg70等碱性残基）与LPS的脂质A和R3核心多糖形成氢键网络（总结合位点达12个）。其中，EgAgB8/1的Phe62与LPS的R3核心糖链形成疏水相互作用，而Glu59与脂质A的磷酸基团形成盐桥。这种多价结合模式可能解释EgAgB对LPS的强效捕获能力。

### 创新性发现与机制解析
1. **选择性LPS结合特性**：EgAgB8/1仅识别LPS的脂质A和R3核心，对O-antigen和R2核心结合力较弱。这种选择性使其能够区分LPS与其他脂多糖（如LTA），后者主要激活TLR2信号通路。
2. **双重作用机制**：
- **促炎作用**：微量LPS通过EgAgB载体进入细胞，激活TLR4/MD2信号通路，产生低水平IL-6和NO。
- **抗炎作用**：当EgAgB与过量LPS结合时，其优先捕获LPS分子，阻断TLR4二聚化（抑制率达80%），并干扰NF-κB和IRF3信号轴。
3. **脂质介导的信号干扰**：EgAgB携带的疏水脂质（如胆固醇酯）可能通过改变膜脂流动性，抑制TLR4/MD2复合物的构象变化，类似HDL对LPS的屏蔽作用，但效率更高。

### 与现有研究的对比
1. **与HDL的差异**：hHDL主要通过静电屏蔽捕获LPS，而EgAgB通过特异性蛋白-糖脂相互作用形成更稳定的复合物。实验显示，EgAgB在10 μg/mL浓度下即可抑制IL-6分泌达50%，而hHDL需100 μg/mL才达到相似效果。
2. **基因多态性影响**：研究团队发现EgAgB8/1亚型在乌拉圭和阿根廷的包虫株中表达量差异达3倍，这可能解释不同地区患者对EgAgB治疗的响应差异。

### 理论意义与潜在应用
1. **寄生虫免疫逃逸机制**：EgAgB通过捕获宿主循环中的LPS（肝脏是主要来源），可能降低肝脏炎症水平，促进包虫囊的稳定存在。
2. **抗炎治疗新靶点**：研究显示，重组EgAgB在实验性结肠炎模型中可降低促炎细胞因子（IL-6、TNF-α）水平达60%，且与已知LPS scavenger分子（如HDL）相比，抑制效率提升2-3倍。
3. **诊断标志物开发**：EgAgB与LPS的结合能力可通过表面等离子共振（SPR）技术建立定量模型，为包虫病快速检测试剂盒开发提供依据。

### 局限性及未来方向
1. **LPS污染控制不足**：尽管通过LAL检测控制了EgAgB的LPS残留，但未完全消除，可能影响机制研究的准确性。
2. **跨物种验证缺失**：目前研究均基于小鼠和人类细胞模型，需在羊等天然宿主中验证EgAgB的生理功能。
3. **临床转化挑战**：包虫囊液纯化成本高昂（每克需处理200 mL液体），需开发更高效的EgAgB8/1重组表达工艺。

本研究首次揭示了EgAgB通过特异性捕获LPS发挥免疫调节作用，为设计新型抗炎药物（如工程化EgAgB亚型）提供了理论依据。后续研究可结合冷冻电镜解析EgAgB8/1-LPS复合物结构，或通过单细胞测序技术追踪DC亚群分化调控机制。