免疫谱分析揭示前列腺癌中外泌体对免疫调节与疾病进展的贡献

《Scientific Reports》：Immune profiling identifies the contribution of extracellular vesicles to immune modulation and progression in prostate cancer

本研究针对前列腺癌（PCa）免疫微环境调控机制不清的问题，聚焦肿瘤源性细胞外囊泡（EVs）的免疫调节作用。研究人员通过分离不同侵袭性PCa细胞系（PC-3/DU 145/LNCaP）的EVs，发现高侵袭性PCa-EVs可显著降低CD14+CD16+单核细胞比例并激活T细胞亚群，同时诱导IL-6、IL-10等细胞因子级联反应。该研究为利用EVs介导的免疫标记物作为PCa进展预测工具提供了新依据。

　　

前列腺癌作为全球男性第四大癌症死因，其诊断金标准前列腺特异性抗原（PSA）在侵袭性亚型早期预测方面存在明显局限。肿瘤微环境（TME）中细胞间通讯的复杂性，尤其是细胞外囊泡（EVs）介导的免疫调节作用，已成为当前研究热点。这些由肿瘤细胞分泌的膜性囊泡能够携带蛋白质、核酸等生物活性分子，重塑免疫景观并促进肿瘤进展。然而，前列腺癌EVs如何参与免疫逃逸机制，以及不同恶性程度肿瘤来源的EVs是否存在功能差异，仍是亟待阐明的科学问题。

为解析这一难题，来自意大利IRCCS SYNLAB SDN研究所的Giovanni Pecoraro团队在《Scientific Reports》发表最新研究，通过系统比较不同侵袭性前列腺癌细胞系来源EVs对免疫细胞的影响，揭示了EVs作为疾病进展指示器的潜力。

研究采用超速离心法从三种具有代表性恶性特征的前列腺癌细胞系（雄激素依赖型LNCaP、雄激素非依赖型DU 145和PC-3）中分离EVs，并通过纳米颗粒追踪分析（NTA）、蛋白质免疫印迹和扫描电镜进行标准化表征。重点分析了这些EVs对健康供者外周血单核细胞（PBMCs）免疫表型及细胞因子分泌谱的调节作用。

EVs表征确认研究可靠性

研究人员通过差速超速离心获得高纯度EVs，NTA显示PC-3 EVs浓度最高（7×10¹⁰颗粒/毫升），而LNCaP EVs（3.5×10¹⁰颗粒/毫升）和DU 145 EVs（5.9×10⁹颗粒/毫升）次之。Western blot检测到标志蛋白syntenin和CD63表达，且内质网标记calnexin呈阴性，符合国际细胞外囊泡研究指南（MISEV2023）标准。扫描电镜观察显示所有EVs均呈现典型杯状形态，直径范围90-130纳米。

高恶性EVs特异性调节单核细胞亚群

流式细胞术分析发现，PC-3 EVs和DU 145 EVs处理能显著降低CD14⁺CD16⁺单核细胞比例（p<0.001），而LNCaP EVs无此效应。为验证雄激素信号缺失的影响，团队构建了神经内分泌分化LNCaP（tNEPC LNCaP）模型，其EVs同样引起单核群显著减少，提示该免疫调节作用与肿瘤去分化状态相关。

PC-3 EVs显著激活T细胞免疫应答

尽管三种EVs对CD4⁺/CD8⁺T细胞总数无影响，但PC-3 EVs处理组HLA-DR⁺活化T细胞比例及活化/总数比值显著升高（p<0.05）。值得注意的是，tNEPC LNCaP EVs激活CD8⁺T细胞的能力甚至超越PC-3 EVs，凸显神经内分泌转化EVs的独特免疫调节强度。

细胞因子谱揭示免疫抑制微环境形成

ELISA检测显示，PC-3 EVs和DU 145 EVs处理组中IL-6、MIP-1α、IL-7等促炎因子及IL-10、G-CSF等免疫抑制因子显著上调（p<0.0001-p<0.05）。这种Th1/Th2混合反应模式提示高恶性EVs可能通过细胞因子风暴促进免疫耐受。

本研究首次系统比较了不同恶性程度前列腺癌EVs的免疫调节功能差异，证实EVs可通过调控单核/T细胞活化及细胞因子网络参与肿瘤免疫逃逸。特别是PC-3 EVs和tNEPC LNCaP EVs展现的强免疫调节活性，为理解去势抵抗性前列腺癌（CRPC）的恶性进展提供了新视角。研究人员指出，EVs对CD14⁺CD16⁺单核群的耗竭可能破坏免疫监视平衡，而T细胞异常活化则反映代偿性免疫应答失效。细胞因子谱特征进一步表明EVs可同时启动促炎和免疫抑制通路，这种"双重打击"效应可能是肿瘤实现免疫逃逸的关键。

该研究的创新性在于将EVs的免疫调节功能与肿瘤细胞固有特性（雄激素敏感性、神经内分泌分化）动态关联，为开发基于EVs免疫标记物的前列腺癌风险分层策略奠定了理论基础。未来通过扩大临床样本验证及EVs载物组学分析，有望实现从"EVs指纹"角度重构前列腺癌免疫分型体系，推动精准医疗发展。