综述：在动物模型中制备抗N-甲基-D-天冬氨酸受体脑炎主动免疫模型的进展

《Frontiers in Immunology》：Progress in the preparation of an active immunization model of anti-N-methyl-D-aspartate receptor encephalitis in animals

抗NMDAR脑炎主动免疫动物模型研究进展：系统分类、建立方法及临床应用前景

　　
近年来，抗NMDAR脑炎作为中枢神经系统自身免疫性疾病的典型代表，其病理机制研究已从基础医学向转化医学领域延伸。动物模型的构建在解析这一复杂免疫病理过程中发挥着关键作用，而主动免疫模型因其更贴近人类疾病的免疫激活路径，逐渐成为研究的热点。本文系统梳理了主动免疫模型三大技术路径——完整NMDAR蛋白免疫、GluN1亚基肽段免疫及HSV感染诱导免疫模型的构建原理、技术要点及研究局限性，旨在为后续机制探索和临床转化提供理论框架。

### 一、主动免疫模型的技术分类与构建原理
当前研究主要采用三种主动免疫策略模拟人类疾病进程：
1. **完整NMDAR蛋白免疫**：通过脂质体包裹的天然构象NMDAR四聚体（GluN1-GluN2B复合体）激活Th1/Th2细胞双通路。 Jones团队采用电穿孔技术优化蛋白纯度后，通过尾静脉注射使C57BL/6小鼠产生特异性IgG抗体，成功复现焦虑样行为、癫痫发作及海马区神经炎症（Linnoila等，2023）。该模型特别适用于研究T细胞介导的抗原呈递机制，其病理特征与人类患者高度吻合。
2. **GluN1亚基肽段免疫**：聚焦NMDAR外端结构域（NTD）的N368-G369关键抗原表位。 Ding等（2021）采用F质粒重组技术制备的GluN1356-385多肽，通过完全弗氏佐剂（CFA）的协同作用，可在8周内诱导小鼠产生滴度达1:64000的特异性抗体，其认知功能下降幅度较自然衰老小鼠提升3.2倍。该技术路径的最大优势在于可精准调控抗原表位，便于开展分子疫苗研发。
3. **HSV感染诱导免疫**：利用HSV-1（17syn+株）通过鼻内接种激活树突状细胞交叉呈递抗原。该模型特别适用于研究病毒感染与神经退行性变的关联机制。 Linnoila等（2019）发现，在HSV持续感染期间给予抗病毒治疗（阿昔洛韦，剂量20mg/kg）的小鼠，其脑脊液中NMDAR抗体IgG1亚型占比达67.3%，且神经炎症程度与病毒载量呈正相关。

### 二、模型构建的技术难点与优化方向
1. **蛋白构象稳定性**：完整NMDAR蛋白在制备过程中易发生磷酸化修饰（GluN1 Ser871位点），导致免疫原性下降。最新研究采用乙酰基化修饰技术，使蛋白半衰期延长至72小时（Zhang等，2024），显著提升模型稳定性。
2. **抗原呈递机制调控**：GluN1亚基的TSS1和TSS2表位需通过MHC-II分子呈递。研究发现，添加30%灭活卡介苗（H37Ra）可增强Th细胞激活，使抗体产生速度加快40%（Ding等，2023）。
3. **神经炎症时空匹配**：理想的模型需实现免疫应答与神经病理变化的时空同步。通过多重免疫组化（IHC）发现，在主动免疫模型中，小胶质细胞激活时间点较抗体产生滞后3-5天，提示需建立动态监测系统。
4. **行为学评估标准化**：现有模型在癫痫发作检测方面存在方法学差异。建议统一采用视频监测系统（记录发生率、发作持续时间、癫痫指数），结合Morris水迷宫和社交恐惧箱的量化评分。

### 三、模型特性与适用场景对比
| 模型类型 | 优势指标 | 局限性 | 适用研究 |
|-------------------|------------------------------|----------------------------------|--------------------|
| 完整蛋白免疫 | Th1/Th2双通路激活 | 制备成本高（约$5000/构建） | 抗原表位-病理效应 |
| GluN1亚基肽免疫 | 抗体滴度可控（1:10-1:100000） | 缺乏T细胞协同作用 | 药物筛选（如ART5803） |
| HSV感染免疫 | 病毒-抗体联动机理 | 感染周期长（6-8周） | 治疗窗期研究 |

### 四、临床转化价值与改进建议
1. **诊断标志物开发**：模型中检测到CSF中IgG1/IgG4比值（0.87±0.12）与人类患者高度相关（r=0.89），建议将其纳入生物标志物体系（Shu等，2023）。
2. **治疗靶点验证**：针对NMDAR内吞信号通路（如AP3复合体调控），可设计siRNA纳米颗粒递送系统。初步实验显示，采用该技术的小鼠模型中，NMDAR表面表达量在72小时内回升37%（Xia等，2024）。
3. **模型个性化改进**：建议引入器官芯片技术（3D脑组织模型）替代部分动物实验，可减少60%以上的动物使用量（Li等，2025）。
4. **跨物种验证体系**：建立人源化小鼠模型（如B/RF/P revertant品系），其脑脊液中NMDAR抗体亚型分布与人类患者完全一致（Feng等，2025）。

### 五、未来研究方向
1. **动态监测技术**：开发基于CRISPR的活体成像系统，实时追踪NMDAR表达水平（GluN1荧光标记技术）和神经炎症指标（IL-1β、TNF-α）。
2. **联合治疗策略**：在免疫模型中同步测试靶向T细胞的免疫检查点抑制剂（如PD-1单抗）与抗炎药物（如IL-1受体拮抗剂Anakinra）的协同效应。
3. **神经可塑性研究**：利用双光子钙成像技术，观测海马CA1区突触可塑性变化，建立从分子互作到行为表型的完整证据链。

当前主动免疫模型已能复现人类疾病的80%以上临床特征（Fujita等，2025），但在神经病理细节（如突触后密度变化）和免疫微环境（B细胞/T细胞比例）方面仍存在优化空间。建议未来研究聚焦于建立多组学整合分析平台（表型-免疫-代谢三联谱），以加速精准治疗方案的转化应用。