新型自纳米乳化水仙花（Narcissus tazetta L.）油输送系统的开发及其在体外对乳腺癌和胰腺癌的抑制作用研究

《Food Hydrocolloids for Health》：Development of a new self-nanoemulsifying Narcissus tazetta L. oil delivery system and study of its anti-breast and anti-pancreas cancers activities in vitro

抗乳腺癌和胰腺癌活性：Narcissus tazetta油负载自纳米乳化系统（NT-SNEDDS）的制备、稳定性和细胞毒性研究。采用30%聚山梨酯80、55%聚乙二醇600和15%油酸乙酯制备NT-SNEDDS，形成40±8 nm的油滴纳米乳剂，储存30天无相分离。MTT和TUNEL实验显示，NT-SNEDDS对MCF-7和PANC-1细胞的半数抑制浓度分别为0.17%和0.21%，显著高于纯油。其机制涉及DNA断裂和凋亡通路激活。

　　
本研究聚焦于开发一种新型自纳米乳化药物递送系统（SNEDDS），以提升水飞蓟素（Narcissus tazetta）油对乳腺癌（MCF-7细胞）和胰腺癌（PANC-1细胞）的抗癌活性。研究团队通过优化配方成分，构建了以乙基 oleate（15%）、吐温80（30%）和聚乙二醇600（55%）为核心的SNEDDS体系，并系统评估了其理化特性、稳定性和抗肿瘤效果。

**研究背景与意义**
乳腺癌和胰腺癌作为全球高发恶性肿瘤，其治疗面临多重挑战。传统化疗药物存在水溶性差、生物利用度低、靶向性不足及易引发耐药等问题。纳米药物递送系统通过改善药物分散性、稳定性和生物利用度，成为解决上述问题的关键方向。近年来，SNEDDS因能自发形成纳米乳剂且无需外部乳化剂，在口服给药领域备受关注。但天然油类成分的负载效率、细胞渗透性及安全性仍需深入探索。

**材料与方法**
研究采用伊朗弗尔阿姆省冬季采集的Narcissus tazetta花青素，通过冷溶剂萃取法获得粗提油。配方设计基于三元相图分析，确定乙基 oleate（油相）、吐温80（表面活性剂）和聚乙二醇600（辅助乳化剂）的最佳配比（15:30:55）。纳米乳剂的制备通过梯度混合法实现，并采用动态光散射（DLS）和扫描电镜（FE-SEM）进行粒径和形态表征。细胞毒性评估采用MTT法，并通过TUNEL染色检测凋亡标志。

**关键发现**
1. **理化特性优化**
- NT-SNEDDS形成粒径为40±8 nm的纳米乳滴，比纯油溶液更小（空白SNEDDS为30±6 nm），且聚分散指数（PDI）低于0.05，表明粒径分布高度均一。
- FE-SEM证实乳滴呈球形且分散均匀，但真空干燥可能导致样本收缩，需结合DLS数据综合评估。
- Zeta电位测定显示12.9±1.8 mV，负电位表明乳滴表面电荷稳定，有利于延长循环时间。

2. **稳定性验证**
空白SNEDDS和NT-SNEDDS在常温避光条件下储存30天未出现沉淀或分层，证明配方具有优异的物理稳定性。但未提及长期储存（如数月）或极端条件下的稳定性数据，可能需进一步验证。

3. **抗肿瘤活性显著增强**
- **IC50值对比**：纯油在2.0%浓度时对MCF-7和PANC-1的细胞存活率分别降至69.5%和75.0%，而NT-SNEDDS在0.17%和0.21%浓度时已达到显著抑制效果（P<0.05），且高剂量时差异极显著（P<0.0001）。
- **作用机制**：通过TUNEL染色发现NT-SNEDDS诱导细胞凋亡，表现为DNA断裂和线粒体途径激活（如Caspase-3/8/9活性升高）。值得注意的是，NT-SNEDDS对乳腺癌细胞的抑制效果优于胰腺癌细胞，可能与两者细胞膜脂质组成差异、药物摄取效率及耐药机制不同有关。例如，MCF-7细胞高表达雌激素受体，可能增强对脂质纳米粒的摄取，而PANC-1细胞因肿瘤微环境致密性和P-糖蛋白过度表达，导致药物渗透受阻。

4. **配方优化策略**
研究团队采用多目标优化方法，重点解决三个核心问题：
- **油相选择**：乙基 oleate作为长链 triglyceride（LCTs），可通过淋巴途径吸收，但需验证其与天然油成分的相容性。
- **表面活性剂组合**：吐温80（HLB 15）与聚乙二醇600的协同作用可降低界面张力，同时避免离子型表面活性剂带来的毒性风险。
- **负载量控制**：通过调整油相比例（15%）平衡疗效与制剂黏度，确保纳米乳剂在胃肠道中自发乳化。

**创新性与局限性**
- **创新性**：首次将Narcissus tazetta油负载至SNEDDS体系，并发现其诱导DNA损伤的活性与文献报道的Narcissus属植物抗病毒、抗肿瘤特性一致（如Shawky等，2015）。该配方在降低IC50值的同时保持高生物相容性（空白SNEDDS细胞存活率>98%）。
- **局限性**：
1. 未明确油中活性成分种类，仅通过IC50间接评估疗效，后续需结合HPLC-MS分析关键成分（如生物碱或萜类化合物）。
2. 缺乏体内实验数据，无法验证纳米乳剂在活体中的靶向性、代谢过程及长期毒性。
3. 细胞模型仅涵盖两种癌变细胞系，需扩展至更多临床相关细胞株以验证普适性。

**应用前景与挑战**
NT-SNEDDS为天然药物递送提供了新思路，其优势在于：
- **高负载率**：油相占比15%，且在1.0%浓度时已实现显著抑癌效果。
- **安全性**：配方中无离子型表面活性剂，且对正常细胞无毒性（空白组细胞存活率接近100%）。
- **制备便捷性**：无需高压均质或超声处理，通过温和摇动即可完成乳化。

**未来研究方向**
1. **成分鉴定**：需通过色谱技术分离NT油中的活性成分，明确其具体作用靶点（如DNA修复酶抑制或促凋亡蛋白激活）。
2. **体内验证**：建议采用移植瘤模型或裸鼠实验，评估纳米乳剂在实体瘤中的渗透性及疗效。
3. **工艺标准化**：需优化原料来源（如不同产地Narcissus tazetta油的成分差异）、制备流程（如冷提取时间对油得率的影响）以实现工业化生产。
4. **毒性评估**：长期毒性实验需考察纳米颗粒在器官中的蓄积情况，尤其是对肝、肾等代谢器官的影响。

**结论**
该研究成功开发了一种基于SNEDDS技术的天然抗癌制剂，通过协同表面活性剂与油相，显著提高了Narcissus tazetta油的生物利用度及抗肿瘤活性。尽管在体内应用和活性成分解析方面存在不足，但其成果为开发口服型纳米抗癌药物提供了重要参考，尤其对克服胰腺癌治疗难题具有潜在价值。未来需结合多组学分析（如蛋白质组学检测凋亡相关通路）和临床前模型，推动该技术向实际转化。