《Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis》：Evaluation of photochemical behavior of ebastine and elucidation of its photoproducts
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本研究开发并验证了一种高效液相色谱-串联质谱法用于测定单端肽菌素E（PME）在血浆和肺泡灌洗液（ELF）中的浓度。结果显示，血浆谷浓度与急性肾损伤（AKI）显著相关（p=0.021），而吸入给药后ELF浓度显著高于血浆，为个体化治疗提供依据。
张胜楠|杨如伟|谭宏毅|谢瑞英|李叶军|刘静晶|刘春|裴琪
中南大学第三湘雅医院药学系，中国湖南长沙410013
摘要
多粘菌素E（PME）是治疗多重耐药革兰氏阴性菌感染的重要“最后手段”抗生素，但其狭窄的治疗窗口和高药代动力学变异性要求进行治疗药物监测（TDM）。在本研究中，我们开发并验证了一种灵敏的LC–MS/MS方法，用于测定接受硫酸多粘菌素治疗患者的血浆和上皮衬液（ELF）中的PME含量。血浆和支气管肺泡灌洗液样本经含有0.1%甲酸的乙腈沉淀处理后，使用三重四极杆质谱仪进行分析，并根据FDA/EMA指南进行了验证。对40名重症患者的血浆样本进行回顾性分析发现，有急性肾损伤（AKI）和无AKI患者的血浆谷浓度存在显著差异（中位数分别为1.50 μg/mL和0.79 μg/mL，p = 0.021），但未观察到与临床疗效的明显相关性。在前瞻性队列研究中，四名患者的配对血浆和ELF数据表明，吸入给药后的ELF浓度明显高于血浆浓度，这为硫酸多粘菌素吸入后的肺部药物暴露提供了首个临床证据。总体而言，该验证方法适用于PME的常规TDM。这些发现为未来研究提供了依据，以评估血浆谷浓度和ELF浓度，从而指导重症患者的个性化治疗。
引言
多重耐药（MDR）革兰氏阴性菌的出现，尤其是碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌、铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌，给治疗带来了巨大挑战。因此，曾经因毒性而被弃用的多粘菌素再次被引入临床实践作为最后一线抗生素[1]、[2]、[3]。其中，多粘菌素E（PME，即硫酸多粘菌素）是一个关键的治疗选择。其临床制剂主要包括多粘菌素甲酯钠（CMS，一种需要在体内水解转化为活性多粘菌素的前药）和硫酸多粘菌素（本身具有活性）[4]、[5]、[6]。硫酸多粘菌素主要由多粘菌素E1（PE1）和多粘菌素E2（PE2）组成，两者占总含量的85%以上。在治疗药物监测（TDM）中，通常使用PE1和PE2的联合浓度作为多粘菌素暴露的替代指标[7]、[8]、[9]。
由MDR革兰氏阴性菌引起的呼吸机相关性肺炎和医院获得性肺炎是硫酸多粘菌素治疗的最常见适应症[10]、[11]、[12]。然而，静脉注射（IV）给药常受限于药物在肺组织中的渗透性差，以及肾毒性和神经毒性[13]、[14]、[15]。因此，吸入给药被提出作为一种有前景的辅助方法，旨在绕过全身循环的限制，将高浓度的药物直接输送到感染部位，从而可能降低全身毒性[11]、[12]、[16]、[17]。尽管吸入多粘菌素在临床应用中越来越普遍[18]，但关于其在上皮衬液（ELF）中的药代动力学数据仍然很少，且没有研究报道硫酸多粘菌素吸入后的ELF药物暴露情况。这种证据不足阻碍了基于证据的剂量策略的开发和优化[19]、[20]、[21]、[22]。
此外，由于多粘菌素具有多阳离子肽结构，在生物分析样品制备和检测过程中容易发生非特异性吸附，这对定量准确性和重现性构成了重大挑战[23]、[24]、[25]。早期的尝试，如Landersdorfer等人的研究[21]，采用了高效液相色谱（HPLC）结合固相萃取、衍生化和荧光检测来测定血浆和支气管肺泡灌洗液中的多粘菌素和CMS。然而，这些方法劳动强度大、依赖试剂，并且无法区分不同的多粘菌素成分，限制了其在常规临床监测中的应用。
鉴于这些局限性，本研究旨在建立并验证一种简单、灵敏的LC-MS/MS方法，能够可靠地测定血浆和ELF中的PE1和PE2含量。在此基础上，我们进一步探讨了接受硫酸多粘菌素治疗患者的系统暴露、临床疗效和毒性之间的关系，并首次表征了吸入给药后的ELF暴露情况。这些发现为优化基于证据的个性化多粘菌素治疗策略提供了实验依据。
标准品和试剂
硫酸多粘菌素购自CFWLABs Inc.（美国特拉华州纽瓦克）。多粘菌素B参考标准品作为内标（IS）购自上海第一生化制药有限公司（中国上海）。乙腈（HPLC级）和甲醇（MeOH，HPLC级）购自默克公司（德国达姆施塔特）。甲酸（FA，HPLC级）购自ACS公司（美国特拉华州威尔明顿）。三氯乙酸（TCA，分析级）购自国药化学试剂公司
质谱和色谱条件
IS、PE1和PE2的过渡数据采用MS
2扫描模式获得，参数基于前体-产物离子对的MRM分析进行优化。选定的定量过渡分别为PE1的m/z 585.1 → 101.2、PE2的m/z 578.6 → 100.8以及内标PB1的m/z 602.6 → 241.3。PE1、PE2和IS的详细质谱参数见表1。在当前色谱条件下，LC-MS/MS分析的总运行时间为7分钟。
结论
本研究开发并验证了一种LC–MS/MS方法，能够同时测定接受硫酸多粘菌素治疗患者的血浆和ELF中的PE1和PE2含量。该方法表现出优异的灵敏度、准确性和稳定性，适用于临床TDM。在回顾性临床队列研究中，血浆PME浓度与疗效无显著相关性，但升高的稳态谷浓度与AKI风险增加显著相关。
资助
本研究得到了非传染性疾病-国家科技重大专项（项目编号2024ZD0533000）和中国国家自然科学基金（项目编号82373966）的支持。
作者贡献声明
杨如伟：撰写 – 原始草稿、可视化、验证、软件、实验设计、数据管理。
谭宏毅：撰写 – 审稿与编辑、验证、资源协调、方法学设计。
谢瑞英：验证、软件使用、实验设计。
李叶军：验证、方法学设计。
刘静晶：正式数据分析、数据管理。
刘春：撰写 – 审稿与编辑、正式数据分析、概念构思。
裴琪：撰写 – 审稿与编辑、项目监督、方法学设计、资金管理
利益冲突声明
作者声明没有已知的财务利益或个人关系可能影响本文的研究结果。
