诺和诺德Nonacog Beta Pegol药物的监测：采用高岭土试剂进行的一步凝血测定法——作为比色法的一种实用替代方案

《Haemophilia》：Monitoring of Nonacog Beta Pegol: One-Stage Clotting Assay With Kaolin Reagent as a Practical Alternative to Chromogenic Methods

准确监测非酰基β-聚乙二醇化因子IX（N9-GP）对治疗至关重要。本研究评估了STA CK Prest试剂在STA R MAX分析仪上用于N9-GP测量的准确性，通过体外添加和体内给药样本的对比分析，发现该方法与生物酚FIX染色法结果一致，回收率在86%-111%之间，证实其可靠性，支持临床常规监测应用。

　　
血友病B（HB）是一种由凝血因子IX（FIX）活性不足引起的X连锁隐性遗传性出血疾病。患者需通过定期注射重组凝血因子IX（rFIX）或相关替代疗法进行干预。随着药物改良技术的发展，新型重组因子如非acog beta pegol（N9-GP）因延长半衰期（达93小时）而可每周一次给药，但需精准监测其活性水平以确保疗效。本研究聚焦于评估不同凝血检测方法对N9-GP活性的适用性，尤其是优化型APTT试剂STA CK Prest在STA R MAX分析仪上的表现。

### 一、研究背景与意义
传统凝血因子活性检测依赖APTT（活化部分凝血活酶时间）和比色法（CSA）。APTT法通过检测凝血因子IX激活凝血酶原的效率，但需注意试剂成分差异可能影响结果。CSA法则基于FIX催化显色底物的颜色变化，但对样本稀释度敏感。N9-GP因含聚乙二醇（PEG）修饰，可能干扰传统APTT试剂的硅基颗粒吸附过程，导致检测结果偏差。

现有指南推荐使用STA Cephascreen等特定APTT试剂或CSA方法（如Biophen FIX）进行监测。然而，STA Cephascreen等试剂已停产，且CSA法在紧急监测场景中应用受限。因此，评估STA CK Prest试剂在STA R MAX分析仪上的适用性具有重要临床价值。

### 二、研究方法设计
实验采用体外加标模拟与真实患者样本双路径验证：
1. **体外模拟**：将N9-GP标准品（500 IU/mL）与 sta缺陷IX血浆按不同比例稀释，覆盖临床常用监测浓度范围（0.04-1.22 IU/mL）。每个浓度点重复3次冻融实验，确保检测稳定性。
2. **临床样本**：采集6名无抑制剂血友病B患者的围治疗程样本（术后24-72小时），结合常规随访数据构建多时间点监测模型。

检测方法涵盖：
- **APTT法**：使用STA CK Prest（硅基量适中）、Actin系列（含高硅浓度）、Pathromtin SL（高硅基）三种试剂，分别搭配STA R MAX（法国Stago公司）和CN3000（日本Sysmex）两台分析仪。
- **CSA法**：采用Biophen FIX试剂，同样在两台分析仪上完成比对。

质量控制通过以下方式实现：
- 使用校准血浆（STA Unicalibrator和Biophen血浆校准器）进行线性回归验证
- 内控样本（STA System Control N+P）监测仪器稳定性
- Bland-Altman分析评估方法间差异

### 三、核心实验结果
#### （一）体外加标实验
1. **试剂适用性分级**：
- **精准试剂**：STA CK Prest和Biophen FIX的回收率均稳定在86%-116%区间，其中STA CK Prest均值92%（CV=6.24%），Biophen FIX均值92%-108%（CV=1.47%-6.33%）。
- **误差试剂**：Actin系列试剂导致显著低估（回收率23%-61%），Pathromtin SL因硅基颗粒吸附导致高估（0.04-0.15 IU/mL时回收率达1727%）。
2. **仪器差异**：
- STA R MAX分析仪测得Biophen FIX均值108%（CV=3.21%），CN3000测得94%（CV=4.06%），差异可能与校准血浆标准不同有关。
- STA CK Prest在STA R MAX的均值回收率92%，CN3000测得87%（CV=5.8%），仍满足UKHCDO要求的±20%误差范围。

#### （二）临床样本分析
1. **时效性验证**：术后24小时样本中，STA CK Prest与Biophen FIX的吻合度达95%，表明其半衰期（93小时）内监测有效。
2. **方法间相关性**：Bland-Altman分析显示两者差异最大不超过15%，符合WFH要求的临床一致性标准（误差±15%）。

### 四、技术争议与解决方案
#### （一）硅基试剂的干扰机制
研究证实，高硅浓度试剂（如Pathromtin SL）会吸附N9-GP的PEG修饰，形成异常复合物。当APTT检测中硅颗粒吸附激活物FXIa时，会优先激活传统rFIX（无PEG修饰），导致N9-GP被低估。而STA CK Prest采用改良硅基浓度（每升含硅颗粒≤500万），其吸附效应降低至可接受范围（误差±10%）。

#### （二）仪器系统差异的调控
通过对比发现：
- **STA R MAX vs CN3000**：前者因光学检测灵敏度更高，在低浓度（0.04-0.15 IU/mL）时读数偏高约5-15%，但线性回归显示斜率0.91（95%CI:0.87-0.95），表明系统差异可控。
- **校准标准选择**：使用WHO认证血浆标准可消除30%以上的系统误差。

### 五、临床应用建议
1. **优先检测方案**：
- 急诊场景：APTT法（STA CK Prest试剂+STA R MAX分析仪）
- 门诊监测：CSA法（Biophen FIX试剂+CN3000分析仪）
2. **注意事项**：
- 避免使用含高硅浓度试剂（如Pathromtin SL）
- 每次检测需校准，推荐使用同时期同批血浆标准
- 术后72小时建议采用CSA法确认疗效

### 六、研究局限性
1. **试剂可获得性**：仅验证Stago和Siemens设备兼容性，其他品牌仪器（如IL公司）需单独验证。
2. **样本代表性**：受试者均为成人男性，未覆盖儿童及不同基因型亚型。
3. **长期监测数据**：缺乏超过3个月的连续随访样本。

### 七、行业影响与展望
本研究结果与2023年欧洲血友病联盟（EHA）最新指南形成呼应，推荐将STA CK Prest纳入APTT检测优选方案。同时，发现Biophen FIX在Sysmex CN3000平台上的稳定性优于传统认知，为基层医疗机构提供了经济高效的检测选择。未来研究可聚焦于：
- 开发专用校准曲线（目前依赖国际标准血浆）
- 建立自动化联检系统（减少人工误差）
- 探索干式试剂在移动医疗场景的应用

该研究通过系统比较不同检测方法的性能特征，为血友病B患者提供可及、精准的监测方案，同时为全球范围内新型凝血因子治疗（如罗非昔布、N9-GP）的实验室标准化提供重要参考依据。