p62通过调控TLR4/RIP1/NF-κB通路介导树突状细胞炎症程序在常氧与缺氧环境中的作用机制

《Cellular and Molecular Life Sciences》：Sequestosome-1/p62 Mediates TLR4-Induced Inflammatory Program in Dendritic Cells Under Normoxic and Hypoxic Conditions

语 本研究针对树突状细胞（DCs）在常氧与缺氧微环境中TLR4介导的炎症反应调控机制不明确的问题，探讨了衔接蛋白p62通过其ZZ结构域与RIP1相互作用对NF-κB活化及IL-1β分泌的调控作用。研究发现，p62/RIP1结合是TLR4信号转导的关键环节，小分子抑制剂XRK3F2可特异性阻断该相互作用并抑制炎症反应。该成果揭示了p62在免疫微环境适应性调控中的新功能，为靶向炎症性疾病提供了新策略。

　　

树突状细胞作为免疫系统的“哨兵”，在感知病原体后启动炎症反应，其功能受微环境氧浓度调控。然而，在缺氧的病理环境（如肿瘤或感染部位）中，树突状细胞如何协调Toll样受体4（TLR4）信号与缺氧适应机制，仍是未解之谜。既往研究表明，衔接蛋白p62参与自噬和细胞存活，但其在TLR4触发的炎症程序中的具体作用尚未明确。意大利锡耶纳大学团队在《Cellular and Molecular Life Sciences》发表的研究，首次揭示p62通过结合RIP1介导TLR4信号转导，并证明该机制在常氧与缺氧条件下均稳定存在。

研究采用人单核细胞来源的树突状细胞，通过脂多糖（LPS）激活TLR4，并利用缺氧舱模拟生理性（常氧，21% O₂）与病理性（缺氧，2% O₂）微环境。关键技术包括：Western blot检测蛋白表达与磷酸化、免疫共沉淀分析p62-RIP1相互作用、免疫荧光观察NF-κB核转位、ELISA量化细胞因子分泌、LysoTracker标记自噬溶酶体，以及siRNA和抑制剂（XRK3F2、SAR405）干预实验。样本来源于健康献血者外周血单核细胞，经伦理委员会批准。

2.1 LPS诱导p62/RIP1上调并增强其相互作用

LPS刺激显著提升树突状细胞中p62的mRNA和蛋白水平，同时促进p62与RIP1的结合。该过程伴随NF-κB p65亚基磷酸化增强及核转位，最终导致IL-1β和TNFα分泌增加。

2.2 p62 ZZ结构域抑制阻断NF-κB活化

特异性抑制剂XRK3F2靶向p62的ZZ结构域后，p62/RIP1相互作用显著减弱，NF-κB磷酸化与核转位受阻，效果与TLR4抑制剂TAK242相当，表明p62-ZZ域是TLR4信号的关键节点。

2.3 XRK3F2调控炎症小体活化及细胞因子释放

延长XRK3F2处理时间后，树突状细胞内NLRP3表达与pro-IL-1β水平下降，成熟IL-1β分泌减少，证实p62/RIP1轴参与炎症小体 priming 阶段。

2.4 p62功能复杂性：自噬抑制与ZZ域特异性效应

自噬抑制剂SAR405虽与XRK3F2同样抑制自噬，却增强NF-κB活化和IL-1β分泌；而p62 siRNA敲低虽部分抑制自噬，却意外提升IL-1β释放。这表明XRK3F2的抗炎效应独立于自噬抑制，特异性源于ZZ域阻断。

2.5-2.6 缺氧环境下p62/RIP1轴维持炎症信号

在缺氧条件下，LPS仍可诱导p62/RIP1结合并激活NF-κB，XRK3F2处理同样抑制该通路及HIF-1α积累，证明p62/RIP1是跨氧浓度调控的通用炎症枢纽。

结论与意义

本研究阐明p62作为分子支架，通过ZZ域与RIP1结合，直接桥接TLR4-TRIF信号与NF-κB活化，且该机制在常氧与缺氧环境中均稳定运作。值得注意的是，p62的促炎功能与其自噬相关角色相互独立，凸显其多功能蛋白的特性。成果不仅深化对免疫代谢耦合的理解，更为慢性炎症性疾病（如类风湿关节炎、炎症性肠病）及肿瘤免疫微环境调控提供了新靶点。靶向p62-ZZ域或可成为调节过度免疫反应而不影响基础自噬的精准策略。