去泛素化酶OTUD5通过稳定YAP蛋白，促进了由肝脏星形细胞僵硬引起的活化过程

《Molecular and Cellular Biochemistry》：Deubiquitinase OTUD5 facilitates stiffness-induced hepatic stellate cell activation by stabilizing YAP

肝转移中肝星状细胞（HSCs）激活依赖OTUD5/YAP反馈环路，OTUD5通过去泛素化维持YAP稳定，调控CYR61和CTGF表达，促进HSCs转化及结直肠癌肝转移。

　　

摘要

肝星形细胞（HSCs）能够被激活并转化为促进肿瘤形成的肌成纤维细胞，这是结直肠肝转移的重要原因。除了转化生长因子-β等细胞因子外，基质硬度也是促进HSC激活的关键因素。我们最近的研究表明，OTU去泛素化酶5（OTUD5）会促进肝细胞癌的发展，但其在基质硬度诱导的HSC激活中的作用及其分子机制仍不清楚。我们使用不同组成比例的聚丙烯酰胺水凝胶来模拟不同的基质硬度，并通过Western blotting和免疫荧光技术检测OTUD5、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、结缔组织生长因子（CTGF）、Yes相关蛋白（YAP）、富含半胱氨酸的血管生成诱导因子61（CYR61）、透明质酸（HA）、FLAG、泛素（UB）和MYC的水平。RT-qPCR用于检测OTUD5、YAP、CYR61和CTGF的mRNA表达。通过共免疫沉淀实验确定了OTUD5与YAP之间的相互作用以及YAP的泛素化水平。CCK-8和Transwell实验用于评估HT-29细胞的增殖和侵袭能力。裸鼠皮下共注射模型用于评估HT-29细胞在体内的生长情况。在硬度较高的基质（11 kPa）上培养的HSCs显示出比在硬度较低的基质（2 kPa）上培养的HSCs更高的OTUD5表达水平。OTUD5的敲低显著减弱了基质硬度诱导的HSC激活。在HSCs中，YAP的敲低显著抑制了由基质硬度引起的OTUD5表达增加。YAP的过表达增强了OTUD5的表达，而YAP的敲低和抑制则降低了OTUD5的表达。反过来，OTUD5在HSCs中正向调节了YAP蛋白及其靶基因（如CYR61和CTGF）的表达。共免疫沉淀和免疫荧光实验证实了OTUD5与YAP之间的相互作用。从机制上看，OTUD5作为去泛素化酶，能够去除YAP上的K48泛素链，从而维持蛋白质稳定性。功能上，OTUD5的敲低显著减弱了HSCs在体外诱导的HT-29细胞增殖和侵袭以及在体内的肿瘤生长。我们的研究结果强调了OTUD5/YAP反馈循环在基质硬度诱导的HSC激活中的关键作用，为结直肠肝转移的治疗提供了潜在的靶点。