灵泽方通过调控TLR4/MyD88/NF-κB通路改善痛风性关节炎的机制探索与转录组学分析

《Scientific Reports》：Exploratory study on the efficacy of Lingze mixture in gouty arthritis rats and preliminary analysis of its potential mechanisms via transcriptome sequencing

本研究针对痛风性关节炎（GA）现有治疗药物副作用大的临床难题，开展了灵泽方（LM）的药效评价及机制探索。通过构建单钠尿酸盐（MSU）诱导的大鼠GA模型，结合组织病理学、免疫组化及转录组测序技术，发现LM可剂量依赖性缓解滑膜炎并抑制TLR4/MyD88/NF-κB通路关键蛋白表达。转录组分析进一步提示LM可能通过调节TLR4/NF-κB、MAPK信号通路及氨基酸代谢发挥治疗作用，为中药复方治疗GA提供了分子药理学依据。

　　

痛风性关节炎（Gouty Arthritis, GA）作为一种“痛起来要命”的炎症性关节病，正困扰着越来越多人群。当体内尿酸水平持续偏高，单钠尿酸盐（Monosodium Urate, MSU）结晶会像细小的玻璃渣般沉积在关节腔，触发剧烈的红肿热痛。尽管非甾体抗炎药（NSAIDs）和秋水仙碱等经典药物能暂时缓解症状，但长期使用带来的胃肠道损伤、肝肾毒性等副作用，让患者和医生常常陷入“两难抉择”。

在此背景下，源自《金匮要略》的经方加减化裁而成的灵泽方（Lingze Mixture, LM），凭借临床实践中展现的显著疗效和较少的不良反应，进入研究者的视野。但这样一个由九味中药组成的复方，如何起效？其作用靶点何在？为了揭开传统方剂的现代科学内涵，研究团队开展了一项整合动物药效评价与多组学技术的探索性研究，成果发表于《Scientific Reports》。

关键技术方法概述

研究采用MSU关节注射诱导Wistar大鼠GA模型，设空白组、模型组、依托考昔阳性对照组及LM低中高剂量组。通过踝关节H&E染色评估滑膜炎病理变化，免疫组化（IHC）检测TLR4、MyD88、NF-κB p65蛋白表达。进一步对空白组、模型组和中剂量LM组的滑膜组织进行RNA测序（RNA-seq），通过差异基因分析及KEGG/GO富集分析挖掘潜在信号通路。

研究结果

LM ameliorates synovial inflammation in GA rats

H&E染色显示，模型组滑膜细胞增生、组织紊乱伴大量炎细胞浸润，而LM各剂量组尤其是高剂量组显著改善病理变化，炎症细胞浸润减少，滑膜结构接近正常。

LM inhibits TLR4/MyD88/NF-kB protein expression

IHC结果显示，模型组TLR4、MyD88、NF-κB p65蛋白表达显著上调，LM治疗后呈剂量依赖性下调，高剂量LM效果与依托考昔相当。

Transcriptomic profiling reveals pathway modulation

RNA-seq分析发现模型组与空白组比较显著富集于Toll样受体信号通路、NF-κB信号通路、MAPK信号通路；而LM中剂量组干预后，除上述通路外，丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢通路亦被调控，提示LM可能通过多通路协同发挥作用。

GO analysis of biological functions

GO分析表明LM干预后差异基因主要富集于单原子离子转运、跨膜调控等生物过程，揭示了LM在细胞功能层面的调节潜力。

结论与展望

本研究通过多维度证据链证实LM能有效缓解GA滑膜炎，其机制可能与抑制TLR4/MyD88/NF-κB这一经典炎症通路相关，且转录组学提示MAPK信号通路和氨基酸代谢亦参与其中。尽管研究存在局限性（如机制关联性需进一步验证），但首次将LM的药理作用与先天免疫信号通路明确关联，为中药复方治疗炎症性疾病的现代化研究提供了范式。未来研究可结合通路抑制剂、基因敲除模型及网络药理学等手段，深入解析LM多成分-多靶点的协同作用机制，推动传统方剂向精准医疗转化。