在多药化疗方案中加入不依赖于JNK信号通路的药物，可提高复发性高风险神经母细胞瘤患者的疗效

化疗耐药性在神经母细胞瘤（HRNB）中是主要挑战，本研究通过数学模型和药物筛选发现romidepsin和omacetaxine可绕过JNK依赖性凋亡通路，与标准化疗药（如topotecan、doxorubicin）联用显著增强凋亡诱导和肿瘤抑制效果。在PDX模型中，加入romidepsin的组合（如TRD、rIT）较传统方案（TVD、IT/TEMIRI）延长生存期并改善肿瘤控制率，机制涉及差异化的凋亡网络组件利用。

　　
### 研究背景与目的
神经母细胞瘤（neuroblastoma, NB）是儿童最常见的实体瘤之一，其中高危型神经母细胞瘤（high-risk neuroblastoma, HRNB）对常规化疗耐药性显著，5年总体生存率不足10%。尽管多药联合化疗是HRNB的标准治疗手段，但耐药性仍导致复发和进展。研究团队聚焦于化疗耐药的分子机制，尤其是JNK信号通路在凋亡诱导中的作用，旨在开发新型联合疗法。

### 关键发现
1. **JNK依赖性化疗的局限性**
- JNK信号通路是多种化疗药物（如长春新碱、拓扑替康、阿霉素）诱导凋亡的核心环节。然而，HRNB患者中存在JNK活性受损的细胞亚群，这些细胞对常规化疗耐药。
- 通过数学模型模拟JNK激活，结合单细胞水平的高通量成像分析，发现JNK缺陷的细胞在化疗后仍能通过其他途径存活，导致复发。

2. **JNK不依赖性药物的筛选与机制**
- 研究团队筛选了60余种获批的儿童适用抗癌药，发现两种JNK不依赖性药物：**罗米德肽**（HDAC抑制剂）和**奥马净辛**（蛋白合成抑制剂）。
- **罗米德肽**通过抑制组蛋白去乙酰化酶（HDAC），干扰细胞周期调控蛋白（如Bcl-xL、p21），激活凋亡通路。
- **奥马净辛**通过抑制核糖体A位点，阻断蛋白质合成，导致DNA损伤修复缺陷，从而诱导凋亡。

3. **协同效应的分子基础**
- 联合用药的协同性不依赖于药物靶点的差异，而是源于对凋亡网络组件的差异化利用。例如：
- **拓扑替康**（Topotecan）和**罗米德肽**（Romidepsin）的组合：前者通过拓扑异构酶I抑制导致DNA链交联，后者通过HDAC抑制增加促凋亡蛋白Bcl-xL的降解。
- **阿霉素**（Doxorubicin）与**奥马净辛**（Omacetaxine）的组合：前者破坏DNA结构，后者抑制蛋白质合成，两者共同干扰DNA修复和细胞周期调控。
- 通过功能基因组学（siRNA文库筛选凋亡相关基因）发现，协同效应与药物诱导的凋亡网络通路重叠度低相关。

4. **临床前模型的验证**
- **患者源性异种移植模型（PDX）**：使用复发患者肿瘤细胞建立的原代异种移植模型，验证联合疗法效果。例如：
- 在CCINB02-PDX模型中，**罗米德肽+伊立替康**（Temirabil）组合显著延长生存期（从39天增至48天）。
- **罗米德肽+拓扑替康**（TRD方案）在CCINB01-PDX模型中，使中位生存时间从51天提升至71天，且未出现严重体重下降。
- **体内毒性分析**：罗米德肽单药剂量较低（1.7 mg/kg）即可在体内有效诱导凋亡，且与常规化疗联用未增加毒性。

### 机制创新点
1. **JNK信号通路的“瓶颈效应”**
- JNK活性是多种化疗药物诱导凋亡的共同下游节点。当JNK功能受损时，这些药物无法通过经典通路触发凋亡，但可能通过其他途径（如DNA损伤修复通路、自噬调控）激活耐药表型。

2. **凋亡网络通路的差异化利用**
- 药物协同性取决于对凋亡网络组件的互补调控。例如：
- **罗米德肽**激活凋亡通路的关键调节因子（如RELA、DIABLO），而常规化疗药物（如拓扑替康）主要作用于DNA损伤修复。
- 通过主成分分析（PCA）发现，协同性强的药物组合在三维凋亡通路空间中距离更远，表明其作用靶点差异显著。

3. **耐药性动态演变的机制**
- 复发肿瘤中JNK缺陷细胞的正选择扩增，导致对依赖JNK的化疗药物（如长春新碱、拓扑替康）耐药。
- **罗米德肽**通过稳定促凋亡蛋白Bcl-xL，抵消化疗药物诱导的Bcl-xL降解，增强疗效。

### 临床转化潜力
1. **现有化疗方案的优化**
- **TVD方案替代**：将传统三联疗法（拓扑替康+长春新碱+阿霉素）中的长春新碱替换为罗米德肽，形成TRD方案。在PDX模型中，TRD的凋亡诱导效果比TVD提升30%-40%，且小鼠体重下降幅度降低50%。
- **同步靶向治疗**：联合罗米德肽与伊立替康（SN38），在PDX模型中观察到肿瘤体积缩小速度加快2倍。

2. **耐药性克服策略**
- **早期干预**：在化疗前使用罗米德肽预处理肿瘤细胞，可恢复JNK通路功能，提高后续化疗敏感性（已在体外模型中验证）。
- **剂量优化**：通过生物信息学工具（如CombPDX）优化药物比例，例如将拓扑替康剂量从1 mg/kg降至0.25 mg/kg，仍可维持协同效应。

3. **未来研究方向**
- **新型HDAC抑制剂**：开发靶向特定HDAC亚型（如HDAC6）的药物，减少系统性毒性。
- **联合靶向治疗**：探索罗米德肽与免疫检查点抑制剂（如抗CTLA-4）或PD-1/PD-L1阻断剂的联用。
- **耐药性监测**：建立JNK通路活性动态监测体系，指导个性化用药（如每3个月检测JNK磷酸化水平）。

### 结论
本研究揭示了神经母细胞瘤化疗耐药的核心机制——JNK信号通路的缺陷导致凋亡诱导失败，并通过多组学分析鉴定了罗米德肽和奥马净辛等JNK不依赖性药物。协同效应源于对凋亡网络通路的差异化调控，而非传统意义上的靶点互补。这些发现为设计新型联合治疗方案提供了理论依据，可能显著改善复发神经母细胞瘤患者的生存率。下一步需开展多中心临床试验，验证罗米德肽在HRNB复发患者中的疗效和安全性。