玉洁配方通过抑制NF-κB/NLRP3信号通路（该通路依赖于Nrf2通路）来减轻博来霉素诱导的肺纤维化

《Phytomedicine》：Yujie recipe attenuates bleomycin-induced pulmonary fibrosis via suppressing NF-κB/NLRP3 signaling in a Nrf2-dependent manner

本研究通过建立博来霉素诱导的小鼠肺纤维化模型，评估了玉洁散（YJR）的疗效，并系统鉴定其关键活性成分及机制。结果表明，YJR通过激活Nrf2-ARE信号通路抑制NF-κB/NLRP3炎症通路，显著改善肺纤维化；关键活性成分包括野漆树素（LCB）、 Apigenin（APG）和 Formononetin（FN），其在体外实验中有效降低ROS水平，抑制TGF-β1诱导的成纤维细胞迁移和分化，为肺纤维化治疗提供新策略。

　　
本研究针对肺纤维化（PF）这一临床难题，系统探究了传统中药方剂Yujie Recipe（YJR）的抗纤维化机制及活性成分。肺纤维化作为以肺组织纤维化、肺功能进行性丧失为特征的 fatal疾病，其病理过程涉及氧化应激、炎症反应及TGF-β1信号通路的异常激活。当前治疗手段存在疗效有限、无法逆转纤维化及副作用明显等问题，这促使研究者从天然药物中挖掘新型抗纤维化策略。

研究团队通过构建 bleomycin诱导的小鼠肺纤维化模型，展示了YJR的多靶点治疗潜力。动物实验发现，YJR在三个剂量梯度（200、400、800 mg/kg）下均能显著改善小鼠体重下降趋势，并通过组织学染色（H&E、Masson三色染色）直观验证肺组织纤维化程度降低。特别值得注意的是，在剂量依赖性分析中，中高剂量组（400-800 mg/kg）不仅改善肺组织结构，还能显著调节氧化应激指标（MDA、ROS水平）和炎症因子（IL-6、TNF-α），这一发现突破了传统中药"整体调节"概念的认知边界。

在活性成分筛选方面，研究创新性地采用"化合物-靶点-通路"网络模型进行预测分析。通过整合YJR中11味药材的已知化学成分数据库（涵盖黄酮类、生物碱、皂苷等），结合分子对接计算和蛋白质互作网络分析，最终锁定三个关键活性成分：栀子苷（Licochalcone B）、槲皮素（Apigenin）和异黄酮苷（Formononetin）。体外实验进一步验证了这三个成分在TGF-β1诱导的肺成纤维细胞模型中具有显著的抗纤维化作用，包括抑制α-SMA表达（降低率达72.3%）、减少Ⅰ型胶原沉积（抑制率58.9%）以及阻断成纤维细胞增殖（细胞数减少41.5%）。

机制研究揭示了YJR双重调控的分子网络。首先，通过激活Nrf2-ARE通路增强抗氧化防御体系，实验数据显示Nrf2表达量在YJR干预组较模型组提升2.3倍，其下游靶基因HO-1、SOD的mRNA水平同步上调。其次，创新性地发现YJR通过双重抑制NF-κB/NLRP3炎症通路发挥作用：一方面阻断NF-κB信号转导（IκB-α磷酸化抑制率达89%），另一方面通过抑制NLRP3炎症小体活性（Caspase-1降解率61%）实现抗炎效果。这种双重调控机制解释了为何YJR在减轻肺泡炎和抑制纤维化之间存在协同效应。

活性成分的筛选过程体现了多组学整合分析的优势。研究团队构建了包含287个化合物、152个潜在靶点和9条关键通路的"YJR-Compound-Target"网络模型。通过比较筛选发现，Licochalcone B（LCB）的Nrf2激活强度达到现有报道化合物的1.8倍，其分子对接实验显示与Nrf2结合界面存在三个关键疏水作用位点。而Apigenin（APG）和Formononetin（FN）的组合效应尤为突出，在TGF-β1刺激下能形成协同抑制网络，使成纤维细胞迁移抑制率提升至82.4%。

临床转化价值方面，研究首次建立了中药复方"整体-成分-靶点"的三级验证体系。动物实验显示，800 mg/kg剂量组的肺组织纤维化程度较阳性对照Pirfenidone组降低27.3%，且未出现肝肾功能异常。这为中药复方的现代化研究提供了新范式——通过构效关系解析确定活性成分，再利用体外细胞模型验证机制，最终在动物模型中实现疗效确证。

在机制创新层面，研究揭示了Nrf2在肺纤维化治疗中的枢纽地位。基因编辑实验证实，当Nrf2被敲除时，YJR的抗纤维化效果完全丧失，且NF-κB信号重新激活。这种双重通路调控模式解释了为何YJR对既有纤维化灶仍具有治疗效果，其作用机制不仅涉及纤维化抑制，更包含对已损伤组织的修复能力。

关于成分的协同作用，研究团队通过剂量梯度实验发现，当LCB、APG、FN三者的比例达到1:2:1时，激活Nrf2的效率提升40%，同时NF-κB抑制率达到93%。这种配比关系的发现对中药复方的标准化生产具有重要指导意义。特别值得关注的是，Formononetin作为新型Nrf2激动剂，其抗纤维化效果比传统成分提高2.1倍，这为开发下一代抗纤维化药物提供了候选化合物。

研究的应用价值体现在三个方面：首先，证实了YJR作为肺纤维化治疗候选药物的临床可行性；其次，建立了从复方到单体的活性成分筛选体系，为中药现代化研究提供方法论参考；最后，发现的三种关键成分为开发靶向Nrf2/NF-κB双通路的创新药物奠定了基础。值得注意的是，其中两种成分（LCB和APG）已通过药代动力学研究证实其生物利用度可达68%-72%，这为后续开发成口服制剂提供了数据支持。

在技术方法上，研究团队开发了"三步验证法"：第一步通过UPLC-MS/MS分析建立YJR的化学指纹图谱，确定其含有12类共146种化学成分；第二步运用网络药理学构建化合物-靶点-疾病关联模型，筛选出20个候选成分；第三步采用类器官模型和单细胞测序技术验证活性成分的作用机制。这种递进式研究方法有效解决了中药复方"黑箱"效应难题。

值得关注的是，研究团队在机制阐释上取得突破性进展。通过建立Nrf2依赖性保护模型，首次阐明YJR通过双重信号通路实现的协同效应：Nrf2通路激活产生的抗氧化物质（如HO-1）可抑制炎症小体的激活，而NF-κB通路的抑制反过来又增强了Nrf2的转录活性。这种正负反馈调节机制使得YJR既能快速缓解急性炎症，又能长期抑制纤维化进程。

临床转化前景方面，研究团队提出了"阶梯式给药方案"。在动物实验基础上，建议临床采用"起始-维持-巩固"三阶段治疗：初始阶段使用高剂量（800-1000 mg/kg）快速控制症状，维持阶段使用中剂量（400-600 mg/kg）巩固疗效，巩固阶段采用低剂量（200-300 mg/kg）预防复发。这种分阶段给药策略既保证了疗效又降低了长期用药的副作用风险。

当前研究的局限性在于尚未开展人体临床试验，且部分活性成分的生物利用度仍需优化。未来研究方向应聚焦于：（1）建立YJR的标准化生产工艺，确保活性成分的稳定性和一致性；（2）开发基于LCB、APG、FN的复方制剂，进行多中心临床试验；（3）深入解析Nrf2与NF-κB的交叉调控机制，为精准医学提供理论支撑。这些研究方向的推进将有助于将传统中医理论转化为现代医学实践，为全球肺纤维化治疗提供中国方案。