标准化的葫芦巴籽提取物通过GABAA受体、褪黑素受体和腺苷受体，缓解了卵巢切除（OVX）啮齿动物的更年期睡眠障碍

《Food & Function》：Standardized fenugreek seed extract alleviates menopausal sleep disturbances via GABAA, melatonin, and adenosine receptors in ovariectomized (OVX) rodents

睡眠障碍是更年期女性的常见问题，本研究通过卵巢切除小鼠模型，探讨 Fenugreek种子提取物（FSE）对睡眠的改善作用及机制。实验表明，FSE 高剂量组（300 mg/kg）能显著延长睡眠持续时间，其作用机制涉及激活 GABAA 受体（通过 picrotoxin 敏感位点）和 MTNR1A 褪黑素受体，同时恢复 GABA 和多巴胺水平，降低皮质醇，并上调雌激素受体（ERα/β）和 GPR30 表达。HPLC 分析显示 FSE 富含 trigonelline（1.72%）、protodioscin（6.17%）和 4-hydroxy-L-isoleucine（2.55%），单独或联合使用均能改善睡眠。该研究为功能性食品开发提供了新思路。

　　在现代社会，随着生活方式的不断变化，睡眠障碍正成为越来越普遍的健康问题。这些睡眠问题不仅影响个体的生理健康，还可能对心理状态和整体生活质量造成严重影响。特别是对于进入更年期的女性而言，睡眠障碍是其面临的典型挑战之一。更年期通常发生在45至55岁之间，伴随着体内雌激素和孕酮水平的下降，引发一系列症状，如潮热、情绪波动、疲劳和睡眠障碍。研究表明，多达50%的更年期女性会出现睡眠问题，这些问题不仅与激素水平的变化有关，还可能与夜间出汗、昼夜节律紊乱等生理变化密切相关。睡眠质量的下降进一步导致日间疲劳和情绪不稳定，对更年期女性的身心健康构成双重威胁。因此，寻找安全、有效的自然干预手段来改善更年期睡眠障碍，成为当前研究的重要方向。

近年来，许多研究聚焦于植物提取物作为天然的、非药物性的干预方式，用于缓解睡眠问题。其中，孜然芹（*Trigonella foenum-graecum* L.）因其广泛的传统用途和多种生物活性成分而受到关注。孜然芹种子在食品和草药中被广泛应用，不仅作为调味品提升食物的风味，还因其抗氧化、抗炎、促进消化、调节血糖以及平衡激素水平等特性而被认为具有广泛的健康益处。然而，尽管孜然芹在传统医学中被广泛应用，其在改善更年期睡眠障碍方面的具体作用机制和效果，尚未得到充分研究。因此，本研究旨在探讨标准化孜然芹种子提取物（FSE）及其关键生物活性成分在更年期模型中的潜在作用，特别是其在缓解睡眠障碍方面的效果。

本研究使用了卵巢切除（OVX）的小鼠模型，以模拟更年期相关的激素变化。研究发现，FSE显著改善了OVX小鼠的睡眠障碍，其作用主要体现在延长睡眠时长和提高睡眠质量方面。在五甲烯四氮唑（pentobarbital）诱导的睡眠行为测试中，FSE的高剂量组（300 mg/kg）显著增加了睡眠时长，效果接近正对照组（使用苯二氮?类药物）。此外，FSE的低剂量（200 mg/kg）虽然在延长睡眠时长方面效果不显著，但对睡眠潜伏期（即入睡所需时间）的延长具有一定的促进作用。这些结果表明，FSE具有改善更年期睡眠障碍的潜力，特别是在较高剂量下表现更为明显。

为了进一步探讨FSE的作用机制，研究通过拮抗剂实验揭示了其可能的分子靶点。结果显示，FSE能够激活GABA受体（GABAA）和褪黑素受体1A（MTNR1A）。在GABAA受体的拮抗剂实验中，使用picrotoxin、flumazenil和bicuculline进行阻断后，FSE的促眠效果被显著削弱，这表明GABAA受体在FSE的促眠作用中扮演了重要角色。而褪黑素受体1A的激活则通过luzindole的拮抗实验得到证实，表明FSE可能通过增强褪黑素信号来调节睡眠周期。此外，FSE还被发现能够上调腺苷受体A2A（ADORA2A）的表达，这可能有助于缓解咖啡因引起的失眠。这些结果共同表明，FSE的作用涉及多种神经递质系统，包括GABAergic、melatonergic和adenosinergic系统，以及与雌激素相关的受体表达。

进一步的实验分析显示，FSE能够恢复由卵巢切除引起的神经化学和激素失衡。具体而言，FSE提高了脑内GABA和多巴胺的水平，同时降低了皮质醇的浓度。这些变化与睡眠障碍的改善密切相关，表明FSE可能通过调节神经递质和激素水平来促进睡眠。值得注意的是，FSE并未改变循环中的雌激素水平，而是通过上调雌激素受体α（ERα）、β（ERβ）和GPR30的表达来增强雌激素反应性。这一机制可能为FSE提供了一种不同于传统激素替代疗法（HRT）的替代方案，因为HRT通常伴随着较高的系统性风险。

在电生理分析方面，FSE显著增强了非快速眼动睡眠（NREM）期间的δ波活动。δ波与深度睡眠和恢复性睡眠相关，其活动的增强可能意味着FSE能够改善睡眠结构，提升睡眠质量。此外，FSE对NREM睡眠的改善效果明显，而对REM睡眠（快速眼动睡眠）的影响则不显著。REM睡眠通常与情绪调节和记忆巩固有关，因此FSE可能在调节更年期睡眠障碍中，主要针对NREM睡眠的改善。

在对FSE中主要生物活性成分的分析中，研究发现其含有较高的trigonelline（1.72%）、protodioscin（6.17%）和4-hydroxy-L-isoleucine（2.55%）。这些成分在单独使用或联合使用时均显示出促进睡眠的作用，且在高剂量下效果更为显著。其中，trigonelline在促进睡眠方面表现出最强的活性，其单独使用时能够显著延长睡眠时长，效果与FSE相当。protodioscin和4-hydroxy-L-isoleucine也表现出一定的促眠作用，但效果强度不及trigonelline。这些结果表明，FSE中的多种成分可能共同作用，以达到改善睡眠的效果。而trigonelline由于其能够穿透血脑屏障，可能在其中扮演了核心角色，与其他成分形成协同效应。

从临床应用的角度来看，FSE的使用剂量在动物实验中被设定为200 mg/kg和300 mg/kg。研究发现，这两种剂量在改善睡眠方面均表现出一定的效果，且未观察到明显的毒性反应。基于动物模型，研究人员进一步计算了人类等效剂量（HED），发现200 mg/kg和300 mg/kg分别对应于人体约16.2 mg/kg和24.3 mg/kg的剂量，这相当于一个60 kg成年人每天摄入约973 mg和1459 mg的FSE。这些剂量水平在日常饮食中是可行的，表明FSE有可能作为功能性食品或膳食补充剂应用于改善更年期睡眠障碍。

然而，尽管FSE显示出良好的促眠效果，其作用机制仍需进一步明确。例如，FSE是否通过调节GABAA受体的多个结合位点发挥作用？其与褪黑素受体1A的相互作用是否具有特异性？此外，FSE对腺苷受体2A的上调是否仅限于短期效果，还是具有长期调控能力？这些问题需要进一步的研究来解答。同时，FSE中的其他成分，如多酚、黄酮类化合物、生物碱和皂苷等，可能也对睡眠有贡献，但目前尚未进行系统研究。

此外，研究还发现，FSE在卵巢切除小鼠中对睡眠结构的改善效果具有一定的剂量依赖性。低剂量的FSE虽然对睡眠时长的改善效果有限，但其对睡眠潜伏期的影响值得关注。而高剂量FSE则能够显著提升睡眠质量，尤其是在NREM睡眠阶段。这种剂量效应可能提示FSE的使用需要考虑个体差异，以确保最佳的促眠效果。同时，研究也指出，FSE在改善睡眠方面的作用可能与体内多种系统的调节有关，包括神经递质、激素水平和睡眠周期的调控。

在功能性食品和营养补充剂的开发中，FSE的标准化和质量控制显得尤为重要。本研究中使用的FSE经过HPLC分析，确保其含有一定浓度的生物活性成分，从而保证其促眠效果的可重复性和一致性。然而，研究还指出，不同批次的FSE可能在成分比例上存在差异，因此，未来的标准化研究需要进一步优化这些成分的配比，以最大化FSE的促眠效果并确保其安全性和有效性。

本研究还揭示了FSE在更年期模型中的潜在应用价值。由于更年期女性面临睡眠障碍的高风险，FSE作为一种天然提取物，可能为她们提供一种安全、有效的替代方案。与传统药物相比，FSE不仅具有较低的副作用风险，还可能通过多种机制协同作用，提高睡眠质量。此外，FSE的促眠效果并未依赖于系统性雌激素的恢复，而是通过调节相关受体的表达和信号传导来发挥作用，这可能使其在某些情况下比HRT更具优势。

尽管研究结果具有一定的临床意义，但本研究仍存在一些局限性。例如，实验仅在短期的OVX模型中进行，未能全面评估FSE在长期使用中的效果和安全性。此外，研究未涉及昼夜节律相关的参数，这可能限制了对FSE如何调节睡眠周期的全面理解。因此，未来的研究需要考虑更长时间的实验设计，以评估FSE的长期效果，并进一步探索其对昼夜节律的潜在影响。

综上所述，本研究揭示了FSE在缓解更年期睡眠障碍方面的潜力。通过多种实验手段，研究确认了FSE对GABAergic、melatonergic和adenosinergic系统的调节作用，以及其对雌激素受体表达的增强效果。这些发现不仅为FSE在功能性食品和营养补充剂领域的应用提供了理论依据，也为更年期女性提供了一种安全、自然的干预方式。然而，为了更全面地评估FSE的临床应用前景，还需要进一步的研究来探索其长期安全性、剂量优化、作用机制的深入分析以及与其他成分的协同效应。