血清与含抗凝剂的血浆对基于流感病毒神经氨酸酶的血清学检测方法的影响

《Vaccine》：Impact of serum versus anticoagulant-containing plasma on influenza virus neuraminidase-based serological assays

流感病毒神经氨酸酶（NA）抗体检测中，血清与血浆样本的滴定值存在显著差异。通过ELLA和ELISA方法比较不同抗凝剂血浆（肝素、柠檬酸钠、EDTA）与血清的NA抑制（NAI）和NA结合抗体滴定，发现血浆样本的滴定值普遍低于血清，尤其在疫苗接种后差异更明显。Bland-Altman分析显示，约14%-54%的样本滴定值差异超过2倍，且血浆的抗体 fold变化幅度更大（0.96-6.75倍），而血清相对稳定（1.69-2.10倍）。抗凝剂可能干扰抗体-抗原结合，建议统一使用血清以避免评估疫苗免疫原性时的偏差。

　　在当前的流感疫苗研究中，流感病毒的神经氨酸酶（Neuraminidase, NA）被认为是一个重要的抗原靶点，尤其在下一代疫苗开发中。NA作为流感病毒表面的一种关键蛋白，其特异性抗体被认为能够提供更广泛的保护，特别是在流感病毒血凝素（Hemagglutinin, HA）发生变异或与疫苗株不匹配的年份。然而，目前缺乏标准化的NA相关血清学检测方法，这限制了对NA特异性抗体的准确评估。为了弥补这一不足，本研究通过比较血清和不同种类的抗凝血浆样本在两种常用检测方法（酶联凝集素测定法ELLA和酶联免疫吸附测定法ELISA）中的抗体滴度，探讨了样本类型对NA特异性抗体检测结果的影响。

研究发现，尽管血清和不同种类的抗凝血浆样本在ELLA和ELISA检测中表现出良好的相关性，但它们的名义滴度值却存在显著差异。例如，在某些年份，血浆样本的滴度值普遍低于血清样本，而在另一些年份则相反。这种差异不仅影响了检测结果的可比性，还可能对疫苗免疫原性的评估造成偏差。因此，研究建议在NA相关的血清学检测中，应优先使用血清样本以确保数据的一致性和可靠性。

此外，研究还指出，抗凝剂的存在可能对NA特异性抗体的检测产生干扰。不同的抗凝剂（如EDTA、肝素、柠檬酸钠）对血清学检测的影响各不相同，其中EDTA可能导致滴度值的高估，而肝素和柠檬酸钠则可能造成滴度值的低估。这些发现提示，在进行NA特异性抗体检测时，抗凝剂的选择和使用条件需要严格控制，以避免对检测结果的干扰。

在实际应用中，血浆样本由于其在某些情况下更容易获取，常被用于研究和临床试验。然而，这种样本类型的选择可能导致结果的不一致性，尤其是在需要进行跨研究或跨年度比较时。研究通过分析不同年份的血清和血浆样本，发现样本类型对检测结果的影响在不同年份和不同抗原之间存在差异。这表明，在设计和实施NA相关血清学检测时，必须考虑到样本类型的选择及其对检测结果的潜在影响。

研究还发现，血浆样本在某些情况下表现出更高的疫苗应答率，而在其他情况下则低于血清样本。这种差异可能与样本的基线滴度有关，也可能受到样本处理和储存条件的影响。因此，为了确保检测结果的准确性和可比性，研究建议在进行NA相关血清学检测时，应使用统一的样本类型（如血清），并进一步考虑样本类型对检测结果的影响，以推动NA相关血清学检测方法的标准化。

总体而言，本研究的结果表明，尽管血清和血浆样本在NA特异性抗体检测中表现出一定的相关性，但它们的滴度值差异较大，且这种差异在不同年份和不同抗原之间存在变化。因此，在流感疫苗的免疫原性评估中，应谨慎选择样本类型，并考虑使用血清样本以确保检测结果的一致性和可靠性。同时，研究也指出，抗凝剂的选择和使用条件对检测结果具有重要影响，未来的研究应进一步探索这些因素对NA特异性抗体检测的具体机制，以优化检测方法并提高其准确性。