《Neuroscience Letters》：Immunohistochemically-detected differential localization of CXCL14 in mouse cerebellum suggesting the presence of neuronal and glial forms of CXCL14
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本研究使用α和β两种抗CXCL14抗体对小鼠小脑进行染色分析，发现α抗体标记Purkinje神经元，β抗体标记Bergmann胶质细胞，通过双标记免疫荧光和Western blot（约12 kDa）验证，提示小脑存在神经元和胶质细胞特异性表达的CXCL14异构体。
铃木宏文（Hirohumi Suzuki）|山本敏晴（Toshiharu Yamamoto）|长谷川彩（Aya Hasegawa）|玉木彻（Toru Tamaki）|小牧淳也（Jun-ya Komagata）|山田孝良（Takayoshi Yamaga）|赤坂铁（Tetsu Akasaka）|畑龙一郎（Ryu-ichiro Hata）
日本福冈师范学院生物学系，牟纳卡塔（Munakata）
摘要
在本研究中，我们使用两种抗CXCL14抗体（分别命名为α和β）比较了小鼠小脑中的染色特征。α抗CXCL14抗体标记了浦肯野神经元；这一点通过双重免疫荧光染色与calbindin D-28 k（浦肯野神经元的标记物）得到了验证。β抗CXCL14抗体标记了伯格曼胶质细胞；这一点通过与胶质纤维酸性蛋白（伯格曼胶质细胞的标记物）的组合染色得到了验证。通过预先用重组人CXCL14吸附这两种抗体，这两种染色特征均被消除。使用这两种抗体进行的Western blot分析表明，它们都能识别重组人和小鼠的CXCL14蛋白，其迁移位置约为12 kDa。此外，α抗CXCL14抗体在小鼠小脑的Triton-X组分中标记了大约15 kDa和21 kDa的主要条带，以及大约19 kDa的次要条带；而在Tris-HCl组分中未检测到免疫染色条带。相比之下，β抗CXCL14抗体在Tris-HCl组分中标记了大约18 kDa的条带，但在Triton-X组分中未检测到免疫反应条带。这些结果表明，小鼠小脑中至少存在两种形式的CXCL14蛋白：可能是神经元形式和胶质细胞形式。
部分摘录
意义声明
在小鼠中，一种抗CXCL14抗体标记了浦肯野神经元，另一种抗体标记了伯格曼胶质细胞。对小脑进行的Western blot分析表明这两种抗体能够识别不同大小的条带，从而表明存在神经元和胶质细胞形式的CXCL14蛋白。
材料与方法
本研究使用了四只雄性和四只雌性小鼠（C57BL/6）。所有动物实验均按照神奈川齿科大学机构动物护理和使用委员会制定的指南进行（许可编号23–014）。首先使用异氟烷吸入溶液（Pfizer，纽约，美国）对动物进行麻醉，然后通过腹腔注射戊巴比妥钠（Kyouristu Seiyaku Corporation，东京，日本，剂量30 mg/kg）进行深度麻醉。
结果
α抗CXCL14抗体标记了浦肯野细胞及其分支树突（图1A）。通过用重组人CXCL14预先吸附α抗CXCL14抗体，这些染色特征被消除（图1B）。α抗CXCL14免疫反应细胞与calbindin D-28免疫反应细胞相对应（图1C和D），表明这些免疫反应细胞是浦肯野神经元。
相比之下，β抗CXCL14抗体标记了位于小脑分子层中的相对光滑的纤维（图2A）。
讨论
用重组人CXCL14预先吸附这两种抗CXCL14抗体后，每种染色特征均完全消失。Western blot分析表明，这两种抗体都能识别小鼠和人类的CXCL14蛋白，其迁移位置均为12 kDa。这些结果表明，尽管染色特征不同，这两种抗CXCL14抗体能够特异性地识别CXCL14蛋白。免疫组化分析表明，α抗CXCL14抗体...
CRediT作者贡献声明
铃木宏文（Hirohumi Suzuki）：撰写、审阅与编辑、监督。山本敏晴（Toshiharu Yamamoto）：撰写、审阅与编辑、初稿撰写、概念构思。长谷川彩（Aya Hasegawa）：初稿撰写。玉木彻（Toru Tamaki）：实验研究。小牧淳也（Jun-ya Komagata）：初稿撰写。山田孝良（Takayoshi Yamaga）：初稿撰写。赤坂铁（Tetsu Akasaka）：资源提供。畑龙一郎（Ryu-ichiro Hata）：审阅与编辑、监督。
利益冲突声明
作者声明他们没有已知的可能会影响本文研究工作的财务利益或个人关系。
致谢
作者衷心感谢佐藤小姐（Miss M. Sato）提供的优秀技术支持。
