Netrin-DCC的抑制作用能够抑制体内神经内分泌肿瘤的生长

《Endocrinology, Diabetes and Metabolism Case Reports》：Netrin–DCC inhibition suppresses neuroendocrine neoplasm growth in vivo

DCC和Netrin-3通过促进凋亡抑制和细胞存活调控胰腺神经内分泌肿瘤（PNEN）生长，NP137抗体抑制该信号通路有效逆转肿瘤进展，并伴随小核RNA（SNORs）表达上调及RNA加工通路异常。

　　本研究围绕着神经内分泌肿瘤（NENs）中净连蛋白（Netrin）与删除在结直肠癌中的蛋白（DCC）之间的相互作用展开，探讨了其在肿瘤发生和进展中的潜在作用，并评估了一种靶向Netrin-DCC相互作用的单克隆抗体NP137的治疗潜力。Netrin是一类与神经发育相关的蛋白质，其功能不仅限于指导神经突触的生长，还在细胞增殖、迁移和存活等过程中发挥重要作用。DCC作为Netrin的主要受体，其在缺乏Netrin信号时会诱导细胞凋亡，而在Netrin存在时则促进细胞存活。这种双重功能使得DCC在肿瘤发生中具有复杂的调控机制，可能同时具备抑癌和促癌的特性。

研究团队选择了BON-1细胞作为实验对象，这是一种来源于胰腺神经内分泌肿瘤的高分级细胞系。通过对BON-1细胞进行基因表达分析，发现其高表达DCC和Netrin-3，而Netrin-1则未被检测到。这一发现提示，在某些NEN中，Netrin-3可能取代Netrin-1成为主要的信号分子。为了验证Netrin对BON-1细胞存活的影响，研究者通过MTT实验检测了不同浓度Netrin-1对细胞活力的作用，并发现Netrin-1的添加显著提升了细胞存活率。然而，当使用NP137这种Netrin抑制性抗体进行干预后，这种促进作用被明显削弱，表明Netrin-DCC相互作用在维持细胞存活方面具有关键作用。

为了进一步探究这一机制，研究团队还通过siRNA技术下调了DCC的表达，并观察到Netrin-1对细胞存活的促进作用在DCC缺失的情况下被消除。这一结果支持了Netrin-DCC相互作用在NEN细胞存活中的必要性。此外，在体内实验中，研究人员将BON-1细胞移植到裸鼠体内，模拟了肿瘤生长的环境，并通过NP137处理观察到了显著的肿瘤抑制效果。与对照组相比，接受NP137治疗的实验组肿瘤体积明显减少，说明这种抗体在抑制肿瘤生长方面具有良好的应用前景。

在基因表达分析方面，研究团队利用RNA测序技术对NP137处理后的肿瘤组织进行了深入研究。结果表明，NP137处理后的肿瘤组织中，小核仁RNA（snoRNA）的表达水平显著升高，这可能与核糖体功能的改变有关。通过通路富集分析，研究人员发现这些变化主要集中在与RNA加工和核糖体生物合成相关的通路中。这一现象可能与Netrin信号被阻断后引发的细胞凋亡机制有关，因为Netrin的缺失或阻断会激活DCC的内在凋亡信号，而这一过程可能通过促进核糖体降解和RNA加工异常来实现。

在人群层面，研究团队利用The Cancer Genome Atlas（TCGA）数据库对11,506个肿瘤样本进行了分析，发现DCC和Netrin-3的高表达与较差的总体生存率之间存在显著的负相关。这一发现不仅支持了Netrin-DCC相互作用在肿瘤进展中的重要性，还表明通过干预这一相互作用可能成为改善患者预后的潜在策略。进一步的亚组分析显示，在某些肿瘤类型中，如肾癌（KIRP）、皮肤黑色素瘤（SKCM）和甲状腺癌（THCA）中，DCC和Netrin-1的高表达与更高的死亡风险相关，而在其他类型中，如肾癌（KIRC）则表现出相反的趋势。这提示Netrin-DCC信号在不同肿瘤类型中的作用可能具有一定的异质性，需要进一步研究其在特定癌症类型中的调控机制。

研究还探讨了NP137在不同癌症模型中的治疗潜力。在先前的研究中，NP137已被证明在多种肿瘤模型中具有抗肿瘤活性，包括抑制肿瘤生长、限制转移以及增强细胞凋亡。在临床试验中，NP137对晚期子宫内膜癌患者的治疗显示出良好的安全性和药物动力学特性，并且部分患者出现了稳定的疾病状态。这些结果为NP137在神经内分泌肿瘤中的应用提供了理论依据，尤其是在那些Netrin信号异常活跃的肿瘤类型中。

尽管本研究主要基于BON-1细胞系的实验，但已有大量文献表明，DCC在神经内分泌肿瘤中的失活与染色体18q的缺失密切相关。在小肠神经内分泌肿瘤（NETs）中，DCC的表达水平因染色体缺失而显著下降，而在肺部高分级神经内分泌癌（SCLC）中，DCC的失活同样被广泛报道。此外，Netrin-3在某些NEN中的表达也与肿瘤进展相关，这使得NP137在这些肿瘤类型中的应用更具针对性。虽然本研究中BON-1细胞未表达Netrin-1，但NP137仍然能够通过阻断Netrin-3与DCC的相互作用来抑制肿瘤生长，这可能与其抗体的表位具有较高的同源性有关。

在体内实验中，研究团队发现只有25%的裸鼠形成了可测量的肿瘤，这可能是由于在细胞移植过程中未使用Matrigel作为支持介质。Matrigel是一种富含细胞外基质成分的材料，能够显著提高细胞的存活率和增殖能力。因此，未来的研究可能需要优化移植条件，以提高实验的可重复性和有效性。

综上所述，本研究揭示了Netrin-DCC相互作用在神经内分泌肿瘤中的关键作用，并通过实验验证了靶向这一相互作用的治疗策略的可行性。Netrin-3在某些NEN中的高表达可能使其成为更重要的治疗靶点，而NP137作为一种能够阻断Netrin信号的单克隆抗体，显示出在抑制肿瘤进展方面的潜力。未来的研究可以进一步探索Netrin-DCC信号在不同NEN亚型中的具体作用机制，以及其在临床中的应用价值。此外，优化体内实验模型，提高细胞移植的成功率，也将有助于更全面地理解这一信号通路在肿瘤发生中的调控作用。这些发现不仅为神经内分泌肿瘤的治疗提供了新的思路，也为其他具有异常Netrin信号的癌症类型提供了潜在的治疗方向。