由RIPK3介导的小胶质细胞坏死凋亡在缺血/再灌注后通过释放FGF2导致视网膜神经节细胞凋亡

《Journal of Molecular Neuroscience》：Microglial Necroptosis Mediated by RIPK3 Leads to Retinal Ganglion Cell Apoptosis Through the Release of FGF2 After Ischemia/Reperfusion

研究探讨受体相互作用蛋白激酶3（RIPK3）在视网膜缺血再灌注（IR）诱导的神经元损伤中的作用。通过建立微胶质特异性RIPK3敲除（KO）小鼠模型，结合HE染色、电视网膜图、TUNEL凋亡染色及免疫荧光和Western blot分析，发现RIPK3 KO显著减轻IR引起的视网膜形态损伤和视觉功能障碍，降低凋亡细胞数量及炎症反应。机制研究表明IR激活RIPK3介导的MLKL/FGF2通路，导致视网膜神经节细胞（RGCs）死亡，而RIPK3 KO通过抑制该通路保护神经元。这提示靶向RIPK3可能成为治疗缺血性视网膜病变的新策略。

　　

摘要

本研究的目的是探讨受体相互作用蛋白激酶3（RIPK3）在视网膜缺血/再灌注（IR）引起的视网膜神经元损伤中的作用。研究人员使用特异性敲除RIPK3的小鼠（RIPK3 KO小鼠）建立了视网膜IR模型。通过苏木精和伊红染色以及电视网膜图（electroretinogram）评估视网膜的结构和功能状态。利用末端脱氧核苷酸转移酶dUTP缺口末端标记（TUNEL）技术检测细胞凋亡的情况。免疫荧光和Western blot技术用于检测与坏死性凋亡（necroptosis）及视网膜内神经元相关的蛋白质。视网膜IR后，RIPK3在微胶质细胞中被激活，进而激活了混合谱系激酶结构域蛋白（MLKL）。RIPK3 KO小鼠显著减轻了IR引起的视网膜形态缺陷，并通过保护视网膜内的神经元来防止IR导致的视觉功能障碍。此外，IR后RIPK3 KO小鼠中的TUNEL⁺凋亡细胞数量显著减少，同时视网膜炎症反应也有所减弱。从机制上看，IR损伤通过激活RIPK3进而诱导MLKL和成纤维细胞生长因子2（FGF2）的活性，导致视网膜神经节细胞（RGCs）死亡；然而，RIPK3 KO小鼠能够抑制这一过程。IR后，微胶质细胞中的RIPK3介导的坏死性凋亡会进一步激活MLKL和FGF2，从而加剧炎症反应，促进RGCs的死亡。靶向RIPK3可以通过抑制MLKL/FGF2通路来保护视网膜神经元免受IR损伤，这可能成为治疗缺血性视网膜病变中RGCs退化的潜在方法。

本研究的目的是探讨受体相互作用蛋白激酶3（RIPK3）在视网膜缺血/再灌注（IR）引起的视网膜神经元损伤中的作用。研究人员使用特异性敲除RIPK3的小鼠（RIPK3 KO小鼠）建立了视网膜IR模型。通过苏木精和伊红染色以及电视网膜图（electroretinogram）评估视网膜的结构和功能状态。利用末端脱氧核苷酸转移酶dUTP缺口末端标记（TUNEL）技术检测细胞凋亡的情况。免疫荧光和Western blot技术用于检测与坏死性凋亡及视网膜内神经元相关的蛋白质。视网膜IR后，RIPK3在微胶质细胞中被激活，进而激活了混合谱系激酶结构域蛋白（MLKL）。RIPK3 KO小鼠显著减轻了IR引起的视网膜形态缺陷，并通过保护视网膜内的神经元来防止IR导致的视觉功能障碍。此外，IR后RIPK3 KO小鼠中的TUNEL⁺凋亡细胞数量显著减少，同时视网膜炎症反应也有所减弱。从机制上看，IR损伤通过激活RIPK3进而诱导MLKL和成纤维细胞生长因子2（FGF2）的活性，导致视网膜神经节细胞（RGCs）死亡；然而，RIPK3 KO小鼠能够抑制这一过程。IR后，微胶质细胞中的RIPK3介导的坏死性凋亡会进一步激活MLKL和FGF2，从而加剧炎症反应，促进RGCs的死亡。靶向RIPK3可以通过抑制MLKL/FGF2通路来保护视网膜神经元免受IR损伤，这可能成为治疗缺血性视网膜病变中RGCs退化的潜在方法。