在本氏烟草（Nicotiana benthamiana）中表达融合了RBD抗原、T4肽以及SARS-CoV-2人类C5a片段的重组蛋白

《Russian Journal of Plant Physiology》：Expression of the RBD Antigen Fused T4 Peptide and Human C5a Fragments of SARS-CoV-2 in Nicotiana benthamiana

植物疫苗研发中，Kozak-A3Dsp-RBD-T4-Linker-C5a-SEKDEL融合肽通过农杆菌转化烟叶，经PCR验证序列表达，SDS-PAGE和Western blot检测到55kDa目标蛋白，表达峰值出现在6天。

　　

摘要

本研究探讨了新型融合肽Kozak-A3Dsp-RBD-T4-Linker-C5a-SEKDEL在Nicotiana benthamiana植物中的表达情况，以及其作为SARS-CoV-2疫苗候选物的潜力。该融合肽包含1392个碱基对的序列，编码SARS-CoV-2的RBD结构域、来自S2亚单位的T4肽段以及人类C5a蛋白。该序列成功克隆到了pMYV719植物表达载体中，随后通过农杆菌（Agrobacterium tumefaciens LBA4404）介导的渗透技术，在N. benthamiana叶片中实现了短暂表达。同时，还共表达了< />

基因以抑制基因沉默，从而增强肽的表达。PCR检测证实了成功的渗透效果，结果显示出现了与目标序列一致（1.4 kb）的DNA条带。随后通过SDS-PAGE和Western blot技术分析了蛋白质表达情况，观察到一条约55 kDa的蛋白质条带，略大于理论预测的51.5 kDa，这可能是由于植物系统中的翻译后修饰所致。Western blot分析进一步证实了抗体能够特异性结合到含有RBD的肽上。不同时间点的表达水平存在差异，其中渗透后第6天的信号强度最高。这一结果与N. benthamiana中的短暂表达模式相符。本研究证明了这种多组分SARS-CoV-2抗原在N. benthamiana中的成功表达，为其作为植物基疫苗的制备提供了理论基础。