新发现VSV-GP特异性CD8+ T细胞表位：BALB/c小鼠模型中抗病毒免疫应答监测的关键突破

《Molecular Therapy Oncology》：Newly identified oncolytic VSV-GP-specific CD8+ T cell epitopes for monitoring of anti-viral immune responses in the BALB/c mouse model

本研究针对溶瘤病毒VSV-GP治疗中抗病毒CD8+ T细胞监测难题，通过多层级生物信息学预测结合实验验证，成功鉴定出11个新型H2-Kd/H2-Dd/H2-Ld限制性表位，并利用ELISpot、ICS及pMHC-I多聚体技术证实其免疫原性。该研究首次系统揭示不同给药途径下抗病毒T细胞动态差异，为优化溶瘤病毒疗法提供了关键监测工具与理论依据。

　　

在癌症治疗领域，溶瘤病毒（Oncolytic Virus, OV）疗法因其能够选择性感染并杀伤肿瘤细胞而备受关注。VSV-GP作为一种经过基因工程改造的溶瘤病毒平台，在临床前研究中展现出显著抗肿瘤活性，并已进入临床试验阶段。然而，OV治疗会同时激发抗病毒免疫应答，其中CD8⁺ T细胞的双重作用（既可能抑制病毒复制，又可能间接增强疗效）使其成为研究焦点。目前，由于缺乏系统性的病毒特异性T细胞表位鉴定工具，抗病毒免疫反应的动态监测仍面临挑战。

为解决这一问题，由Sarah Danklmaier等研究人员在《Molecular Therapy Oncology》发表的研究中，采用多层级生物信息学预测结合实验验证的策略，首次在BALB/c小鼠模型中系统鉴定了VSV-GP特异性CD8⁺ T细胞表位。研究团队通过NetMHCpan等算法预测H2-K^d、H2-D^d和H2-L^d等位基因限制性表位，并利用ELISpot（酶联免疫斑点技术）和ICS（细胞内细胞因子染色）进行功能验证，最终通过定制pMHC-I（肽-主要组织相容性复合体I类）多聚体实现病毒特异性T细胞的直接检测。此外，研究还分析了静脉注射（i.v.）与瘤内注射（i.t.）两种给药途径下抗病毒T细胞的动态差异。

研究结果

1. 表位筛选与验证

通过ELISpot初步筛选，研究人员发现9个H2-K^d、6个H2-D^d和4个H2-L^d肽池能激活T细胞。进一步通过矩阵去卷积和单肽验证，最终鉴定出5个H2-K^d（如N6、N7）、4个H2-D^d（如P23、M33）和2个H2-L^d（N1、N13）表位。这些表位均能诱导显著的IFN-γ分泌，且ICS实验证实其特异性源于CD8⁺ T细胞。

2. 表位分布与特性

11个表位均位于VSV-GP基因组的前三个蛋白（VSV-N、VSV-P、VSV-M），其中VSV-N蛋白包含5个表位，提示病毒蛋白表达梯度可能影响免疫原性。表位长度以9肽为主，且C末端均为疏水性氨基酸，符合小鼠MHC-I结合特征。

3. 给药途径对抗病毒T细胞的影响

在CT26.CL25结肠癌模型中，i.v.给药诱导的病毒特异性CD8⁺ T细胞频率显著高于i.t.给药（脾脏中8/11表位有统计学差异）。此外，肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）中T细胞频率高于脾脏，表明病毒特异性T细胞倾向于富集于感染部位。

4. pMHC-I多聚体应用

定制多聚体成功检测到H2-L^d-N1、H2-L^d-N13等表位特异性T细胞，但部分表位（如H2-K^d-N6）因TCR-pMHC结合稳定性不足而检测信号较弱，提示多聚体技术需进一步优化。

结论与意义

本研究首次在BALB/c模型中系统鉴定了VSV-GP特异性CD8⁺ T细胞表位，建立了可靠的抗病毒免疫监测体系。研究发现i.v.给药更易激发系统性抗病毒T细胞应答，且表位分布特征为理解病毒免疫优势提供了新视角。这些成果不仅为VSV-GP及其衍生疗法的优化提供了关键工具，也为临床中联合免疫检查点阻断（ICB）等策略提供了理论依据。随着VSV-GP进入临床试验（NCT05155332），此类监测工具有望助力个体化疗效评估与治疗策略调整。