MiR-4664-3p作为非小细胞肺癌（NSCLC）中潜在的诊断、预后和免疫治疗生物标志物：通过调节CD8+ T细胞来调控肿瘤进展

《Frontiers in Oncology》：MiR-4664-3p as a potential diagnostic, prognostic, and immunotherapeutic biomarker in NSCLC: modulation of tumor progression through CD8 + T cell regulation

miR-4664-3p高表达与非小细胞肺癌（NSCLC）预后不良及免疫逃逸相关，通过抑制PRKCB增强CD8+T细胞活性并抑制肿瘤生长，提示其作为预后标志物和治疗靶点的潜力。

　　非小细胞肺癌（NSCLC）是全球范围内癌症相关死亡的主要原因之一，其致死率的高企主要源于肿瘤微环境（TME）中复杂的细胞间相互作用，这些相互作用不仅限制了治疗效果，还影响了患者的预后。近年来，随着对肿瘤免疫调控机制研究的深入，微小RNA（miRNA）作为一类小分子非编码RNA，其在调控肿瘤进展和免疫逃逸中的作用逐渐受到关注。miRNA能够通过靶向调控基因表达，影响细胞周期、凋亡、血管生成、转移以及免疫反应等关键生物学过程，成为肿瘤研究中重要的调控因子。本研究系统地评估了miR-4664-3p在NSCLC中的表达特征、临床意义及其在肿瘤免疫调控中的作用，为NSCLC的早期诊断、预后评估和免疫治疗提供了新的视角。

### miR-4664-3p的表达特征与临床意义

通过分析来自The Cancer Genome Atlas（TCGA）数据库的NSCLC患者数据，研究人员发现miR-4664-3p在肿瘤组织中显著上调。这种上调与较差的生存率密切相关，表明miR-4664-3p可能在NSCLC的发展过程中发挥重要作用。进一步的Kaplan-Meier（K–M）生存分析和Cox回归模型验证了miR-4664-3p作为独立预后标志物的潜力。在NSCLC患者中，高表达组的总体生存（OS）率显著低于低表达组，这提示miR-4664-3p的表达水平可能成为评估患者预后的关键指标。此外，通过构建包含miR-4664-3p表达水平与临床变量的列线图模型，研究人员评估了该miRNA在预测1年、3年和5年生存概率方面的准确性。结果显示，该模型在预测生存概率方面具有良好的性能，其一致性指数（C-index）为0.645，表明其在临床应用中具备一定的可靠性。

为了评估miR-4664-3p在诊断中的潜力，研究人员还进行了受试者工作特征（ROC）曲线分析。结果显示，miR-4664-3p在区分肿瘤组织与正常组织方面表现出较高的AUC值，达到0.759，这表明其在诊断NSCLC中具有良好的鉴别能力。这些发现不仅为miR-4664-3p在NSCLC中的临床价值提供了依据，也为未来的生物标志物研究和免疫治疗策略的优化奠定了基础。

### miR-4664-3p在免疫调控中的作用

miR-4664-3p的表达不仅与肿瘤进展相关，还与免疫微环境的变化密切相关。通过ESTIMATE算法计算的肿瘤相关评分，如基质评分（StromalScore）、免疫评分（ImmuneScore）和估计评分（ESTIMATEScore），研究人员发现miR-4664-3p高表达组的评分显著低于低表达组，这表明该miRNA可能通过减少免疫细胞浸润来促进肿瘤的免疫逃逸。进一步的TIDE（Tumor Immune Dysfunction and Exclusion）分析支持了这一结论，结果显示miR-4664-3p高表达与更强的免疫逃逸倾向和较低的免疫治疗响应相关。

为了更深入地理解miR-4664-3p在免疫调控中的具体作用，研究人员还分析了其与免疫相关基因的调控关系。通过整合差异表达基因（DEGs）与靶基因预测结果，研究人员确定了166个候选基因，并进一步筛选出其中的关键靶基因PRKCB。PRKCB是蛋白激酶C（PKC）家族的成员，其在多种肿瘤组织中显著下调，并且其高表达与较好的生存预后相关。研究发现，miR-4664-3p与PRKCB的表达水平呈负相关，这一发现通过miRanda算法的序列配对和Pearson相关性分析得到了验证。此外，ROC曲线分析表明，PRKCB在区分NSCLC肿瘤组织与正常组织方面表现出较高的诊断效能，其AUC值达到0.854，这进一步支持了其作为潜在生物标志物的价值。

### PRKCB在免疫微环境中的作用

PRKCB在NSCLC免疫微环境中的作用尤为关键。单细胞转录组学数据揭示了PRKCB在B细胞、CD8+效应T细胞和自然杀伤（NK）细胞中的高表达，而在恶性肿瘤细胞中则表达较低。这一发现表明PRKCB可能在免疫细胞的活化和浸润中发挥重要作用。通过TIMER2.0数据库的分析，研究人员发现PRKCB的表达水平与CD8+ T细胞浸润程度呈正相关，尤其是在肺腺癌（LUAD）和肺鳞状细胞癌（LUSC）中，这一相关性尤为显著。此外，ssGSEA（single-sample gene set enrichment analysis）分析进一步证实了PRKCB与免疫细胞浸润水平之间的联系，表明PRKCB的表达可能影响免疫细胞的募集和功能状态。

在体内实验中，研究人员通过建立小鼠异种移植瘤模型，验证了miR-4664-3p对肿瘤生长和免疫反应的影响。结果表明，抑制miR-4664-3p能够显著降低肿瘤体积和重量，同时增强CD8+ T细胞的浸润和IFN-γ的表达水平。IFN-γ是一种重要的细胞因子，其在CD8+ T细胞被激活后释放，能够增强细胞毒性作用，并诱导趋化因子的分泌，从而促进CD8+ T细胞向肿瘤微环境迁移。这些发现表明，miR-4664-3p可能通过抑制PRKCB的表达，进而削弱CD8+ T细胞的活性，导致免疫逃逸的发生。

### miR-4664-3p的生物学功能与治疗潜力

除了免疫调控功能外，miR-4664-3p在NSCLC细胞的增殖、迁移和侵袭方面也表现出显著的促进作用。通过体外实验，研究人员发现miR-4664-3p的过表达显著增加了细胞活力和DNA合成活性，而其抑制则显著降低了这些指标。此外，伤口愈合实验和Transwell侵袭实验进一步验证了miR-4664-3p对细胞迁移和侵袭能力的增强作用。这些结果表明，miR-4664-3p可能通过调控细胞周期相关基因，如CDK2AP2，促进NSCLC细胞的生长和扩散。

然而，miR-4664-3p的治疗潜力仍需进一步探讨。尽管其在体外和体内实验中显示出抑制作用，但其在免疫治疗中的具体应用仍需更多的临床验证。由于miR-4664-3p能够通过调控多个靶基因影响肿瘤微环境，因此其作为单一生物标志物的特异性可能受到一定限制。为了提高其临床预测效能，未来的研究所需考虑与其他分子标志物或免疫特征的联合分析，以实现更精准的个体化治疗策略。

### 未来研究方向与挑战

尽管本研究提供了关于miR-4664-3p在NSCLC中的重要作用的初步证据，但仍存在一些局限性。首先，研究主要依赖于公共数据库的转录组数据，缺乏对NSCLC患者实际临床队列的验证，尤其是接受免疫治疗的患者。因此，未来的研究需要结合更大规模的临床样本，以进一步确认miR-4664-3p作为免疫治疗反应标志物的临床价值。其次，由于样本量有限、组织异质性和空间分布不均等问题，当前的研究结果在准确性和普遍性方面仍有待提高。未来的探索应结合多中心数据，并利用空间转录组学和单细胞测序等新兴技术，以更全面地揭示miR-4664-3p在肿瘤免疫微环境中的作用机制。

此外，miR-4664-3p可能在不同肿瘤类型中表现出不同的功能，这提示其可能具有双重作用。因此，未来的研究还需进一步探讨其在其他癌症中的调控机制，以明确其作为广谱生物标志物的潜力。同时，由于miR-4664-3p能够调控多个靶基因，其作为单一治疗靶点的可行性仍需谨慎评估。为了提高其作为治疗靶点的特异性，研究者可以考虑将其与其他免疫相关标志物或基因组合使用，以实现更精准的免疫治疗策略。

综上所述，miR-4664-3p在NSCLC的进展和免疫调控中扮演了重要角色。其高表达不仅与较差的预后相关，还可能通过抑制PRKCB的表达削弱CD8+ T细胞的活性，从而促进免疫逃逸。同时，miR-4664-3p的表达特征和临床意义表明其可能成为NSCLC诊断和预后评估的潜在标志物。尽管其在体外和体内实验中显示出一定的治疗潜力，但其在临床转化中的应用仍需进一步验证。未来的研究应结合多中心临床数据、空间转录组学技术和单细胞测序等手段，以更全面地揭示miR-4664-3p在NSCLC中的作用机制，并探索其在免疫治疗中的具体应用价值。