首次报告乌头病毒2型感染华北地区的Aconitum carmichaelii（一种乌头属植物）

《Journal of Plant Pathology》：First report of aconitum virus 2 infecting Aconitum carmichaelii in North China

乌头（Aconitum carmichaelii）在河北首次检测到AcV2病毒，通过RNA测序和RT-PCR确认，其基因序列与云南分离株高度相似（90.59%），系统发育分析显示与烟草蚀纹病毒亲缘关系近，提示AcV2可能广泛分布于中国的乌头种植区。

　　

乌头（Aconitum carmichaelii）在中国、日本和其他亚洲国家广泛种植。它是一种常用的中药，也是治疗多种疾病的重要临床药物来源。乌头植物会受到多种病毒的影响，包括黄瓜花叶病毒、乌头潜伏病毒、乌头病毒A、乌头融合病毒1、醋栗潜伏病毒、苹果茎沟病毒、辣椒脉斑病毒、番茄斑萎病毒、烟草脉曲病毒、马铃薯卷叶病毒、乌头病毒2（AcV2）和乌头β部分病毒1（Cohen等人，2000；Fumiyoshi等人，2008；Wang等人，2021；Yang等人，2022；2023）。AcV2是一种新发现的病毒，首次在中国西南部云南省的乌头植物中被鉴定出来（Yang等人，2023）。2018年，在中国北部的关键地区河北省，有100株出现花叶症状的乌头植物中的10株被观察到（见图S1）。为了确定致病因子，收集了有症状的叶片，并使用Tritol试剂（Invitrogen，加利福尼亚州卡尔斯巴德）按照制造商的建议提取了总RNA。使用Illumina TruSeq Small RNA Sample Prep试剂盒（Illumina，加利福尼亚州圣地亚哥）构建了小RNA文库，并在Illumina Hiseq2500平台上进行了测序。共获得了34,673,599个高质量的读取序列。经过去除接头和低质量序列后，使用CLC Genomics Workbench v.7.0.2软件组装了contigs，其长度范围为50至853个核苷酸。进一步的BLAST分析显示，有30个contigs与AcV2基因组具有高度序列一致性。为了进一步验证这些结果，随机选择了10个有症状样本中的3个，使用根据组装的衣壳蛋白区域设计的引物对（5′-GTTGCTCTGAAGAAGTTGTATCT-3′/5′-TGTGTCGTTCCGTATCTTCCT-3′）进行RT-PCR检测，获得了预期扩增片段的871 bp片段并进行了测序。测序结果确认了AcV2的存在，该序列被存入GenBank，登录号为PV763363。BLAST分析显示，该序列与来自中国西南部云南省的AcV2分离株YZYi（MZ389235）的核苷酸一致性达到90.59%。这一数值超过了目前针对Potyviridae科病毒的分类标准，即衣壳蛋白的核苷酸一致性需达到76%（Adams等人，2005）。基于通过NCBI比对得到的24种Potyviruses衣壳蛋白核苷酸序列的最高一致性，使用MEGA 7程序中的Neighbor-Joining（NJ）方法构建了系统发育树，结果显示AcV2-Hebei与之前报道的AcV2-Yunan聚类在一起，并且与烟草蚀刻病毒（Tobacco etch virus）有密切关系（见图S2）。据我们所知，这是首次在中国北部地区报道乌头中存在AcV2，表明AcV2可能在中国乌头生产区域广泛分布。