野生鸟类禽流感病毒分离成功率的限制因素解析：基于2020-2022高致病性禽流感泛流行期的临床样本研究

《Journal of Virological Methods》：Understanding limitations to successful avian influenza virus isolation from wild birds

本文系统评估了影响野生鸟类禽流感病毒（AIV）分离成功率的关键因素，包括样本采集时间、类型、病毒亚型及RT-PCR Cq值等。研究强调病毒分离（VI）作为世界动物卫生组织（WOAH）金标准对病毒功能表征的重要性，并提出针对低质量样本的优化分离策略，为禽流感监测资源分配提供科学依据。

　　

基于风险的被动监测

在英国，针对禽流感病毒（AIV）的被动监测基于明确标准对"发现死亡"的野生鸟类开展。包括（i）任何郡县单次事件中5只及以上同种野生鸟类死亡，或（ii）感染H5高致病性禽流感（HPAIV）高风险鸟类的个体样本。野生鸟类尸体通常由公众报告（https://www.gov.uk/guidance/report-dead-wild-birds）后送至动物与植物卫生署区域实验室。

尸体采集至初次分子检测时间间隔与病毒分离阳性结果的关系

2020-2022年间所有选作病毒分离（VI）的野生鸟类样本中，尸体采集到口咽（OP）与泄殖腔（C）拭子RT-PCR检测的时间间隔为1-26天（图2）。尽管从尸体发现到完成鉴别检测通常需7-14天，但公众假期可能导致延迟。实验室需优先检测家禽疫情，而野生鸟类样本可能暂存4°C直至下一个检测周期。值得注意的是，病毒分离成功样本的中位延迟时间为4天（IQR 3-6天），未成功样本为5天（IQR 3-8天）。时间间隔超过7天的样本病毒分离成功率显著降低（p<0.0001），但仍有部分延迟13天的样本成功分离病毒，凸显病毒存活能力的差异性。

讨论

病毒分离（VI）仍是世界动物卫生组织（WOAH）诊断多种病原的金标准。病毒学研究的基石在于通过适宜实验室系统获得病毒分离株。对多数禽类病毒而言，无特定病原体（SPF）胚胎鸡胚（ECEs）是最佳实验室模型，病毒可在此实现最优复制。此外，在评估潜在适应性突变时，保持样本真实性至关重要——即使需使用其他禽类胚胎。本研究通过分析2020-2022年高致病性禽流感（HPAIV）泛流行期样本，明确了影响病毒分离成功的关键操作参数。研究强调，尽管RT-PCR的Cq值是预测分离成功的重要指标，但样本质量（如冷链完整性、环境暴露时间）对病毒存活具有决定性影响。基于此，我们提出了针对低质量样本的Cq值阈值优化策略，为监测资源的高效配置提供理论支持。