自填充300微米毛细管色谱柱实现高峰容量分离与深度蛋白质组分析

《Journal of Chromatography A》：Self-Packed 300 μm Capillary Columns Enable High Peak Capacity Separations and Deep Proteome Analysis

本文介绍了一种自填充300 μm毛细管色谱柱的创新方法，系统优化了毛细管液相色谱（capLC）参数。研究证明，采用CSH填料的30 cm色谱柱在2小时梯度内可获得530的峰容量，并能耐受0.5-8 μg样品量，在Exploris 240系统上实现近9000种蛋白质的定量，其性能媲美或超越市售最优色谱柱。

　　

^标准样品制备

THP-1细胞培养于含10%热灭活FBS和1×青霉素/链霉素的RPMI 1640培养基（全部购自Thermo Fisher SCIENTIFIC）。4000万细胞在2.5 mL SEPOD缓冲液中裂解，并加入250 U/mL的苯扎酶核酸酶。裂解液浓度通过BCA法测定并调整至2 g/L。样品最终浓度20 mM氯乙酰胺（CAA）和10 mM三(2-羧乙基)膦（TCEP）进行还原烷基化，60℃孵育30分钟...

^{300 μm自填充色谱柱的制造、组件与双重填充流程}

色谱柱组件及型号如图1所示。该色谱柱为内径300 μm、外径800 μm的玻璃毛细管，出口处用玻璃滤片构成的筛板密封。柱入口通过1/16英寸至1/32英寸金属高压接头与进样阀的纳流管路连接，其中金属套环被Cheminert PEEK套环替代，确保硅胶毛细管...

^结论

本研究提出了一种可重复填充300 μm色谱柱的新方法，用于蛋白质组学应用。我们证明填充1.7 μm颗粒的30 cm色谱柱具有极高的峰容量。该色谱柱还表现出高抗过载能力，即使在8 μg上样量下仍能保持良好的峰容量和峰形。

需将结果与文献报道的其他高效分离进行对比。重要的是，我们通过...