延长剂和包装设备对奥西米羊（Ossimi Rams）冷冻保存精子超微结构变化及繁殖指标的影响

《Microscopy Research and Technique》：Effects of Extender and Packaging Devices on Ultrastructural Changes and Reproductive Index of Cryopreserved Spermatozoa of Ossimi Rams

精子冷冻保存技术优化研究：采用Tris-EY、Tris-SBL、Tris-BHT三种稀释剂和塑料管、颗粒两种包装方法，通过双因素方差分析发现塑料管包装显著提升rams精子解冻后的活力（p=0.003）、存活率（p<0.0001）和膜完整性（p<0.0001），但未显著影响线粒体/尾部/核损伤（p>0.05）。生殖性能方面，Tris-SBL塑料管组妊娠率达85.7%且产仔数1.5，而Tris-BHT颗粒组最低71.4%和1.2，但均未达统计显著性。需进一步验证妊娠率与产仔数的关联性。

　　

摘要

精子冷冻保存是提高绵羊繁殖计划中人工授精效果的关键技术。本研究评估了不同稀释剂和包装方法对解冻后公羊精子质量、超微结构及潜在繁殖性能的影响。从五只健康的Ossimi公羊身上收集精液，并使用三种冷冻保存介质进行稀释：Tris-卵黄（Tris-EY）、添加1%大豆卵磷脂的Tris（Tris-SBL）或添加2 mM丁基化羟基甲苯的Tris（Tris-BHT）。稀释后的精液被装入塑料吸管或颗粒中，然后置于液氮中进行冷冻保存。解冻后的精子质量通过评估其运动能力、存活率和膜完整性来评定。精子的超微结构通过透射电子显微镜（TEM）进行分析，并计算繁殖指数。采用双因素方差分析（ANOVA）来研究稀释剂和包装方法的影响。结果表明，与颗粒包装相比，使用塑料吸管包装显著提高了精子的解冻后质量，表现为更高的运动能力（p = 0.003）、存活率（p < 0.0001）和膜完整性（p < 0.0001）。然而，无论是包装方法还是稀释剂类型，均对质膜状态、顶体完整性或线粒体、尾部和核的损伤没有显著影响（p > 0.05）。超微结构分析证实，无论使用哪种稀释剂（Tris-EY、Tris-SBL或Tris-BHT），塑料吸管都能有效保持精子的超微结构，包括细胞核、头部、顶体、质膜和线粒体。包装方法和稀释剂类型对绵羊的受孕率和产仔数没有显著影响（p > 0.05）。值得注意的是，使用Tris-SBL的塑料吸管包装具有最高的受孕率（85.7%）和产仔数（每只母羊1.5只幼崽），而使用Tris-BHT的颗粒包装则具有最低的受孕率和产仔数（分别为71.4%和1.2只）。本研究证实，塑料吸管包装显著改善了精子的解冻后质量；虽然Tris-EY在繁殖性能上表现更好，但仍需进一步研究以确定其对妊娠率和产仔数的统计显著性。

利益冲突

作者声明没有利益冲突。