针对金黄色葡萄球菌的溶菌性噬菌体的分离与特性鉴定

《Brazilian Journal of Microbiology》：Isolation and characterization of lytic bacteriophages against Staphylococcus aureus

本研究通过琼脂覆盖法从牛乳腺炎相关金黄色葡萄球菌的富集培养液中分离出5个噬菌体（pS1-pS5），其中pS1-pS3具有高效裂解特性。电镜分析显示其属Caudoviricetes。pS1对多种金黄色葡萄球菌株及标准株均敏感，裂解效率达10/21；而pS2、pS3仅裂解金黄色葡萄球菌，稳定性测试显示其在60-70℃及pH 2-10条件下差异显著。

　　

摘要

本研究的目的是分离并鉴定针对与牛乳腺炎相关的金黄色葡萄球菌（S. aureus）的溶菌性噬菌体。采用琼脂覆盖技术从富集的浆液和牛奶样本中分离噬菌体。鉴定内容包括噬菌斑形态、场发射扫描电子显微镜（FE-SEM）观察、pH值和热稳定性分析、宿主范围测定（点印迹法）、吸附实验以及一步生长曲线分析。溶菌效果通过平板接种效率（EOP）方法进行评估。共分离出5种噬菌体（pS1至pS5），其中pS4和pS5属于温和型噬菌体，这一点从它们的溶菌模式可以判断出来。分析结果显示，pS2和pS3产生的噬菌斑清晰且呈针尖大小，而pS1产生的噬菌斑较大且透明。FE-SEM将这三种噬菌体归类为Caudoviricetes病毒科。吸附实验和一步生长曲线分析表明，这些噬菌体的吸附时间在9至15分钟之间，潜伏期为30至50分钟，裂解效价为pS2为68 pfu/细胞、pS1为220 pfu/细胞、pS3为280 pfu/细胞。稳定性测试显示，在60°C和70°C条件下，pS1、pS2和pS3的热稳定性存在显著差异（p?p?S. aureus分离株、标准菌株（ATCC 12600和ATCC 29213）以及S. chromogenes和S. haemolyticus的临床分离株均对pS1敏感。相比之下，pS2和pS3仅对S. aureus分离株表现出溶菌活性，而对S. chromogenes或S. haemolyticus无活性。在21株测试分离株中，pS1对10株显示出良好的溶菌效果，而pS2和pS3分别仅对3株有效。总体而言，本研究鉴定了三种针对牛乳腺炎相关S. aureus的溶菌性噬菌体，并证明了它们在体外对浮游S. aureus的杀灭效果。