基于Stable Converter的级联放大技术，实现DNA酶和Cas12a的协同作用，用于电化学发光检测DNA腺嘌呤甲基转移酶

CRISPR-Cas12a与双位点哑铃型转换器（DDC）及智能球状DNAzyme（SASD）结合，实现循环信号放大，用于高灵敏电化学发光（ECL）检测DNA甲基转移酶（Dam）活性，检测限8.61×10?? U/mL，线性范围1.0×10??至1.0 U/mL。

　　

尽管CRISPR-Cas12a因其附带的分裂活性和可编程性而成为一种强大的分析工具，但其用于准确、灵敏地检测非核酸靶标（如DNA腺嘌呤甲基转移酶（Dam））的应用仍受到缺乏稳定且灵敏的信号转换策略的阻碍。在这里，我们开发了一种稳定的双位点哑铃形转换器（DDC），该转换器与智能别构球形DNA酶（SASD）和Cas12a结合使用，实现级联放大，从而能够进行高精度和灵敏的电化学发光（ECL）检测。具体而言，DDC的耐核酸酶的闭环结构首先被Dam甲基化，随后被DpnI切割，将Dam的活性转化为模拟靶标（MT）。这种MT随后与SASD杂交，触发别构转变，重新构成DNA酶。激活的DNA酶不仅释放Cas12a激活剂，还能再生MT，从而启动循环反应以实现强烈的信号放大。随后，激活的Cas12a通过切割ECL电极上的铁氰化物标记的淬灭探针来恢复氮掺杂碳点（N-CDs）的ECL信号，从而实现对Dam活性的定量分析。所提出的生物传感器具有宽线性范围（1.0 × 10^–6至1.0 U/mL^{–1–7 U/mL–1，为早期检测和低丰度DNA甲基化提供了强大的工具。}