电穿孔递送CRISPR/Cas9系统实现皱纹盘鲍肌肉生长抑制素基因编辑

《Marine Biotechnology》：Electroporation-based CRISPR/Cas9 Gene Editing in Haliotis Discus Hannai

本研究针对海洋经济贝类皱纹盘鲍育种效率提升的难题，开发了基于电穿孔的CRISPR/Cas9基因编辑递送系统。研究人员以肌肉生长抑制素（MSTN）基因为靶点，证实三种sgRNA均能有效切割目标片段，其中sgRNA1/2体外活性显著。电穿孔后12.7±5.4%受精卵出现损伤畸形，存活幼虫中检测到MSTN靶区突变。该研究为海洋软体动物基因编辑提供了新方法参考。

　　

作为具有重要经济价值和生态意义的海洋软体动物，鲍鱼在可持续水产养殖中扮演关键角色。CRISPR-Cas9（Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats/CRISPR-associated protein 9）基因编辑技术的发展与应用为提升育种效率开辟了新途径。此前已通过显微注射技术在鲍鱼中实现CRISPR/Cas9介导的基因编辑。本研究选取皱纹盘鲍（Haliotis discus hannai）的肌肉生长抑制素（Myostatin, MSTN）基因作为靶点，结合电穿孔递送系统开展CRISPR-Cas9基因编辑实验。结果表明，三种单链引导RNA（sgRNA）均能有效靶向并切割目标片段，其中sgRNA1和sgRNA2表现出较高的体外活性。电穿孔后，研究人员观察并统计了转染对受精卵胚胎发育的影响，发现12.7±5.4%的受精卵出现损伤畸形。电穿孔24小时后收集存活的幼虫进行DNA提取与测序，在MSTN靶标区域内鉴定出两种潜在突变。这些结果为完善和发展CRISPR介导的海洋软体动物（如鲍鱼）基因编辑方法提供了重要参考。