《Experimental Eye Research》：circ-0007006 Attenuates Fibrosis in Thyroid-Associated Ophthalmopathy by Stabilizing HBEGF Expression
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甲状腺相关性眼病（TAO）纤维化中环RNA circ-0007006通过miR-383-3p/HBEGF轴抑制纤维化相关基因表达及SMAD2/3信号通路，为TAO纤维化治疗提供新靶点。
徐志辉|鲍晓丽|孙安琪|史璐|王曦|曾一文|陈洪茹|张特|杨华生|叶慧静
中山眼科中心眼科国家重点实验室，中山大学；广东省眼科与视觉科学重点实验室，中国广州
摘要
甲状腺相关眼病（TAO）是一种自身免疫性眼眶疾病，其特征是炎症和组织重塑，其中纤维化是II型TAO的主要且常常不可逆的病变特征。尽管免疫抑制疗法的效果有限，但仍然迫切需要找到针对纤维化TAO的有效分子靶点。环状RNA（circRNAs）已被证实是多种疾病中的关键调节因子，然而它们在TAO中的作用尚未得到充分研究。在本研究中，我们通过高通量RNA测序发现hsa_circ_0007006在纤维化TAO组织中显著下调。对眼眶成纤维细胞的功能分析表明，circ-0007006通过下调COL1A1、α-SMA、HAS1和HAS2基因以及抑制SMAD2/3的磷酸化来抑制纤维化。机制上，circ-0007006作为miR-383-3p的内源性竞争RNA，从而稳定HBEGF的表达。 rescue实验显示，外源性HBEGF可以缓解circ-0007006敲低引起的促纤维化效应。这些发现表明circ-0007006/miR-383-3p/HBEGF轴是TAO纤维化的一个新的调控途径，并支持circ-0007006作为TAO纤维化亚型的潜在治疗靶点。
引言
甲状腺相关眼病（TAO）是一种器官特异性的自身免疫性疾病，是成人中最常见的眼眶疾病。其特征是眼眶结缔组织的炎症和重塑，临床表现包括眼球突出、复视和视力损害（1, 2, 3, 4）。根据组织病理学特征（5），TAO可分为两种亚型：I型主要为脂肪生成型，II型主要为肌生成和纤维化型。I型TAO表现为眼眶脂肪膨胀和相对较轻的纤维化，而II型TAO则以眼外肌显著增大和纤维化为特征，预后较差，视力丧失的风险增加。眼眶成纤维细胞（OFs）是TAO中的关键效应细胞，它们可以分化为脂肪细胞或肌成纤维细胞，这一过程被认为是TAO亚型病理异质性的基础（6）。
尽管TAO的自身免疫机制已被广泛研究，但临床亚型分化的分子基础仍不清楚，尤其是环状RNA（circRNAs）在此过程中的作用。circRNAs是一类具有共价闭合环结构的非编码RNA，具有高稳定性和抗外切核酸酶降解的能力（7, 8, 9）。最新研究表明，circRNAs通过多种机制发挥重要的转录后调控作用，包括作为microRNA（miRNA）的海绵样物质（10）、与RNA结合蛋白相互作用以及调节基因转录和mRNA稳定性。
最近的研究强调了circRNAs在自身免疫性疾病中的作用（11, 12）。然而，它们在TAO发病机制中的作用——尤其是在亚型特异性组织重塑中的作用——仍不清楚。有假说认为circRNAs可能通过调节炎症和纤维化信号通路来影响这种分化。
在我们之前的研究中（13），我们对I型和II型TAO患者的眼眶结缔组织进行了高通量RNA测序，并系统地分析了circRNA的表达情况。我们发现hsa_circ_0007006在II型TAO组织中显著下调。生物信息学预测和实验验证表明，circ-0007006可能靶向关键的纤维化基因。功能研究进一步证实，circ-0007006的过表达会减弱纤维化标志物的表达，提示其具有负调控作用。
本研究首次将circRNA表达与TAO临床亚型联系起来。通过确定circ-0007006在眼眶成纤维细胞激活和纤维化中的功能作用，我们的发现不仅填补了TAO分子研究的一个关键空白，也为开发基于circRNA的诊断生物标志物和治疗策略奠定了基础。未来的研究需要进一步探索circ-0007006在TAO相关纤维化中的体内功能和调控机制。
临床样本
临床样本
从被诊断为TAO的患者中收集了眼眶结缔组织样本。对于原代成纤维细胞和眼眶组织，TAO患者接受了眼眶减压手术。因眼内脉络膜黑色素瘤而接受眼球摘除术的患者被用作对照组。从这些患者收集的球后眼眶脂肪组织未受到眼内疾病的影响，在解剖学上可与TAO患者的眼眶组织进行比较。
circ-0007006在纤维化TAO组织和细胞中下调
为了识别参与TAO进展的circRNAs，我们对六对I型和II型TAO患者的眼眶结缔组织进行了高通量RNA测序，共鉴定出170个差异表达的circRNAs。其中，hsa_circ_0007006在纤维化II型TAO组织中显著下调（图1A–C）。为了确认所研究的分子是环状RNA，我们首先进行了琼脂糖凝胶电泳和RNase R处理。
讨论
本研究首次确定了circ-0007006在TAO中的抗纤维化作用，并通过miR-383-3p/HBEGF信号轴阐明了其作用机制。由于环状RNA具有共价闭合环结构，因此具有很高的稳定性，并已被证明在多种疾病中具有调控功能。近年来，circRNAs在自身免疫性疾病（14）、癌症（15, 16, 17）和纤维化疾病（18）中的作用受到了广泛关注。
CRediT作者贡献声明
杨华生：撰写 – 审稿与编辑，项目管理，资金获取。徐志辉：撰写 – 初稿撰写，数据可视化，方法学设计，实验设计，数据管理，概念构思。陈洪茹：资源提供。曾一文：正式数据分析。叶慧静：撰写 – 审稿与编辑，项目监督，资金获取，概念构思。张特：资源提供。孙安琪：方法学设计，正式数据分析。鲍晓丽：撰写 – 初稿撰写，数据可视化。
数据和材料的可用性
本研究生成和/或分析的数据集可应合理要求向相应作者索取。资助
本研究得到了中国国家自然科学基金（82371099）、广州市科技计划（SL2023A03J00480）以及广东省重大致盲眼病防治卓越研究中心（304020180）的支持。
利益冲突声明
作者声明没有已知的财务利益冲突或个人关系可能影响本文的研究结果。
