双重靶向PI3K–mTOR通路抑制三阴性乳腺癌转移与免疫治疗抵抗的机制研究

本综述系统阐述了双重PI3K–mTOR通路抑制剂（以Paxalisib为代表）通过靶向EZH2的双重功能（催化性H3K27me3修饰与非催化性NF-κB共激活），抑制三阴性乳腺癌（TNBC）中转移起始细胞（MIC）表型、逆转上皮-间质转化（EMT）、重塑肿瘤免疫微环境，并增强免疫治疗响应的分子机制。研究为克服TNBC治疗抵抗提供了创新性联合策略。

　　

双重PI3K–mTOR阻断抑制增殖迁移并诱导表型转换

研究团队通过对比泛PI3K抑制剂（Wortmannin）、亚型选择性PI3K抑制剂（Idelalisib、Alpelisib）及双重PI3K–mTOR抑制剂（Paxalisib、Omipalisib等）在多种TNBC细胞系（包括MDA-MB-231、MDA-MB-468、SUM149PT和4T1）中的效果，发现双重抑制剂对细胞增殖的抑制效果显著更强。Paxalisib在MDA-MB-231细胞中的IC₅₀值低于2.5 μmol/L，且能有效抑制细胞迁移。进一步研究发现，Paxalisib处理可降低间质标志物Vimentin的表达，同时增加上皮标志物E-Cadherin的表达，诱导间质-上皮转化（MET）。流式细胞术分析显示，Paxalisib处理使CD44^high/CD24^low肿瘤干细胞（CSC）群体减少67%。此外，与耐药性相关的蛋白标志物（ABCB5、ALDH1、Snail）及持久性癌细胞表型标志物（NF-κB p65、FOXQ1、NRF2、NNMT）的表达均显著下降。在患者来源的循环肿瘤细胞（CTC）中，Paxalisib处理还降低了IL-6的表达，并诱导了病毒模拟相关基因（如GBP2）的表达上调。

Paxalisib体内抗肿瘤与抗转移效应

在4T1同系移植模型中，Paxalisib（7.5 mg/kg）与抗PD1联合使用显示出最佳疗效和可耐受的安全性。该联合治疗显著降低了原发肿瘤负荷和重量，并减少了肺转移结节的数量（包括突出型和平坦型结节）。通过ScreenCell滤膜捕获并鉴定CD45^?VIM⁺SNAIL⁺ CTCs，发现联合治疗组小鼠血液中CTC数量显著减少。组织病理学分析表明，治疗组小鼠肺部白细胞浸润和脾脏髓外造血现象减轻，提示系统性的抗肿瘤效果。在联合化疗（Abraxane）的三联方案中，抗肿瘤效果进一步增强。

肿瘤免疫微环境的重塑

利用CODEX多重免疫荧光技术和NanoString nCounter分析，研究揭示了Paxalisib联合抗PD1治疗对肿瘤免疫微环境的深刻影响。空间表型分析显示，联合治疗增加了B细胞、中性粒细胞和树突状细胞（DC）的浸润，同时减少了巨噬细胞和基质细胞的比例。细胞邻域分析（Cellular Neighborhood Analysis）表明，B细胞和中性粒细胞在肿瘤中心聚集，而DC位于外围。转录组分析进一步证实，联合治疗增强了抗原呈递、T细胞受体（TCR）信号、细胞毒性及干扰素（IFN）反应相关基因的表达，并增加了细胞毒性T细胞、B细胞和DC的丰度。此外，与免疫治疗抵抗相关的衰竭T细胞、调节性T细胞（Treg）以及促肿瘤的肥大细胞群体显著减少。

靶向p85β–EZH2–H3K27me3轴

研究发现，PI3K的调节亚基p85β（由PIK3R2编码）在TNBC患者样本和细胞系中存在核定位。Paxalisib处理降低了核内p85β和H3K27me3的水平，并破坏了p85β与EZH2之间的相互作用。通过Duolink邻位连接技术（PLA）证实，在患者化疗后的外周血单核细胞（PBMC）中，p85β–H3K27me3相互作用增强，提示其与耐药性相关。机制上，Paxalisib处理降低了EZH2的mRNA和蛋白表达，并减少了EZH2与NF-κB p65的相互作用。整合EZH2和H3K27me3的ChIP-seq数据与差异表达基因分析显示，Paxalisib调控的EZH2靶基因主要富集于启动子和远端 intergenic 区域，包括炎症（IL-6）、耐药（FOXQ1、NNMT）和转移（KRT14）相关基因。其中部分基因同时被EZH2、H3K27me3和NF-κB结合，提示存在转录抑制与激活的复杂调控。

PIK3R2的临床意义

对公共临床数据集的分析表明，PIK3R2高表达与TNBC患者的不良预后相关，包括更短的远处无转移生存期和总生存期。在接受化疗联合免疫检查点抑制剂治疗的转移性TNBC患者中，PIK3R2高表达者预后更差。此外，在新辅助化疗后残留病灶的患者中，PIK3R2高表达与远处复发风险正相关。这些结果支持PIK3R2作为TNBC预后和预测性生物标志物的潜力。

讨论与意义

本研究深入揭示了双重PI3K–mTOR抑制在TNBC治疗中的多重机制：一方面通过靶向MIC群体、逆转EMT、抑制炎症信号（如IL-6）和诱导病毒模拟，直接抑制肿瘤进展和转移；另一方面通过重塑免疫微环境，增强抗肿瘤免疫并减少免疫抑制细胞群体。更重要的是，研究阐明了Paxalisib通过抑制p85β核 translocation，破坏其与EZH2的相互作用，从而同时靶向EZH2的催化（H3K27me3介导的基因沉默）和非催化（NF-κB介导的基因激活）功能，克服耐药性。这些发现为PI3K–mTOR抑制剂与免疫治疗联合应用提供了坚实的理论基础，并提示PIK3R2可作为精准医学中的生物标志物，用于识别可能从该治疗策略中获益的TNBC患者群体。