使用平均距离计算DLBCL NOS中RCNs的组织结构…… 开放获取

《Cancer Immunology Research》：The organization of RCNs in DLBCL NOS calculated using the average distance... Open Access

单细胞多色免疫荧光分析揭示了弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）肿瘤微环境（TME）的17种细胞表型和10个空间重复性细胞邻近区域（RCN），发现免疫贫乏RCN与CD8+ T细胞富集RCN的邻近促进生存，而PD-L1+ B细胞RCN与CD8+ T细胞RCN的邻近预示不良预后，为免疫治疗提供空间组织依据。

　　近年来，科学家们对弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL）的肿瘤微环境（TME）组成进行了深入研究，但关于细胞间的相互作用以及TME的空间组织如何影响患者预后，仍缺乏系统的了解。本研究通过多重免疫荧光（mIF）、细胞表型分析和邻近关系研究，分析了99例DLBCL患者的1,218,756个单细胞，识别出17种细胞表型和10种反复出现的细胞邻近区域（RCN），从而将DLBCL分为免疫细胞稀少的区域和具有多样免疫细胞浸润的区域。研究发现，B细胞和PD-1阳性T细胞的回避与较低的疾病侵袭性及较好的生存率相关，而CD8阳性T细胞丰富的区域与免疫细胞稀少区域的接近则与良好的患者预后相关，而PD-L1阳性B细胞丰富的区域与CD8阳性T细胞丰富的区域的接近则与较差的生存率相关。这些发现为理解DLBCL的TME空间互动和组织结构提供了新的视角，并对患者的临床预后具有潜在指导意义。

DLBCL是成人中最常见的侵袭性淋巴瘤之一，尽管基于蒽环类药物的免疫化疗在大多数患者中具有治愈性，但仍有30%至40%的患者对治疗不敏感或在随访期间出现疾病进展，即使引入了新型免疫疗法，如嵌合抗原受体（CAR）T细胞或双特异性抗体，仍有约50%的患者因淋巴瘤死亡。这种临床异质性成为提高患者预后的障碍，因此，开发新的工具以改善患者分层成为研究的重点。

根据细胞起源（COO），DLBCL分为生发中心B细胞（GCB）型和活化B细胞样（ABC）型，同时基于常见的基因异常，也识别出了一些遗传亚型。最近，基于TME组成的新型DLBCL亚型也被提出。TME对DLBCL的临床过程有多种影响，一方面作为机体抗肿瘤的防御机制，另一方面也可能通过分泌促肿瘤因子和保护淋巴瘤细胞免受内外威胁而促进其生长。不同免疫细胞及其表型对DLBCL的临床进展具有不同的影响，同时，TME的空间组织规律也被报道。

不同TME的淋巴瘤表现出不同的分子特征，表明它们通过不同的机制在特定环境中存活。例如，炎症性淋巴瘤中NF-κB通路的过度激活是常见的现象，而通过下调HLA I和II或上调免疫检查点分子如PD-1和PD-L1，可以实现对丰富免疫浸润的逃逸。然而，与其他类型的淋巴瘤（如霍奇金淋巴瘤）不同，PD-1和PD-L1的阻断在DLBCL中显示出有限的疗效，因此，仍然需要确定这些疗法在DLBCL中的预测因素。

最近的研究发现，不同癌症，包括DLBCL，其细胞结构并非随机分布，而是以某种组织化的方式存在，其中细胞形成特定的细胞邻近区域，这些区域在不同个体间共享。本研究中，我们发现TME的细胞组成和相互作用具有高度的异质性，不同细胞类型之间的相互吸引或回避模式在样本之间存在显著差异。特别是B细胞与不同T细胞及PD-L1阳性M2样肿瘤相关巨噬细胞（TAM）之间的相互作用。我们还识别出10种RCN，这些RCN具有不同的细胞组成，并发现这些RCN的组织结构与患者预后密切相关。例如，CD8阳性T细胞丰富的RCN与免疫细胞稀少区域的接近与较好的生存率相关，而PD-L1阳性B细胞丰富的RCN与CD8阳性T细胞丰富的RCN的接近则与较差的预后相关。

为了进一步研究RCN的空间组织，我们利用了免疫细胞的表达情况，发现GCB和ABC DLBCL在RCN组成上存在差异。GCB DLBCL更倾向于包含M1样TAM丰富的RCN8，而ABC DLBCL则更倾向于包含PD-L1阳性M2样TAM丰富的RCN10。此外，我们还发现，B细胞丰富且含有免疫细胞的RCN1在GCB DLBCL中更为常见。在进一步分析HLA和B2M表达与RCN组成的关系时，我们发现B2M和HLA-ABC阳性淋巴瘤中，B细胞丰富且含有免疫细胞的RCN1比例较低，而HLA-ABC阳性淋巴瘤中，CD4阳性T细胞丰富的RCN3和PD-1阳性细胞丰富的RCN4比例较高。同时，HLA-DR阳性淋巴瘤中，M2样TAM/非免疫细胞丰富的RCN6比例较低，而B细胞丰富且含有T细胞的RCN9比例较高。

在进一步分析中，我们发现RCN的空间组织与患者预后之间存在显著关联。例如，CD8阳性T细胞丰富的RCN2与免疫细胞稀少区域RCN5的接近与较好的生存率相关，而PD-L1阳性B细胞丰富的RCN7与CD8阳性T细胞丰富的RCN2的接近则与较差的生存率相关。此外，PD-L1阳性M2样TAM丰富的RCN10与CD8阳性T细胞丰富的RCN2的接近也与较差的生存率相关。这些结果表明，RCN的组织结构在预测患者预后方面具有重要价值。

本研究还发现，RCN的组成与DLBCL的遗传亚型和微环境亚型密切相关。例如，PD-L1阳性M2样TAM丰富的RCN10在EZB型DLBCL中较为罕见，而PD-L1阳性B细胞丰富的RCN7则在某些MCD型DLBCL中更为常见。同时，GNA13突变与B细胞丰富且含有免疫细胞的RCN1的比例增加相关，而PRDM1（BLIMP-1）突变则与M1样TAM丰富的RCN8的缺失相关。这些结果表明，某些基因突变可能通过影响TME的组成，进而影响DLBCL的临床行为。

研究还揭示了RCN的空间组织对免疫治疗效果的潜在影响。尽管PD-1和PD-L1靶向免疫治疗在DLBCL中显示出有限的疗效，但我们的数据表明，T细胞在与B细胞相互作用时的PD-1表达具有临床意义。这提示PD-1阻断可能在那些T细胞活性因与B细胞相互作用而受到抑制的患者中具有疗效，进一步强调了患者选择的重要性。此外，我们发现RCN的空间组织与患者预后之间的关系，这为免疫治疗的临床应用提供了新的思路。例如，CD8阳性T细胞丰富的RCN与免疫细胞稀少区域的接近可能与免疫治疗（如双特异性抗体）的疗效相关。

研究结果与先前关于DLBCL TME的细胞邻近结构的研究一致，同时扩展了对这些结构与临床预后之间关系的理解。本研究还表明，RCN的组织结构在预测DLBCL患者对免疫治疗的反应方面具有重要价值。此外，由于本研究的样本量较大，我们能够将这些发现与临床特征和生存数据进行关联，从而增强了研究结果的可靠性。

在进一步分析中，我们还发现，尽管当前的RCN分析主要基于12种抗体的表达，但我们仍识别出17种主要的免疫细胞亚型，包括表达免疫检查点分子的细胞。为了简化分析，我们使用了“M1样TAM”表示抗肿瘤巨噬细胞，“M2样TAM”表示促肿瘤巨噬细胞。尽管这种二分法被广泛使用，但目前的研究表明，巨噬细胞的表型远比这种分类复杂。因此，未来需要更详细的分析以确认这些巨噬细胞的功能。

本研究还强调了RCN分析在DLBCL治疗中的重要性。通过识别RCN，我们能够更深入地理解TME的空间结构，这可能有助于指导免疫治疗的选择。此外，RCN的组织结构可能对免疫治疗的效果产生重要影响，因此，未来的研究应进一步探索RCN在免疫治疗中的预测价值。

总之，本研究揭示了DLBCL TME中的关键细胞相互作用和空间组织特征，并表明这些特征可能对患者的临床预后产生重要影响。这些发现不仅加深了我们对DLBCL TME组织结构的理解，还为免疫治疗的优化提供了新的思路。