使用排列检验估计DLBCL NOS中的细胞相互作用（1,000...） 开放获取

《Cancer Immunology Research》：Cellular interactions in DLBCL NOS estimated using a permutation test (1,00... Open Access

肿瘤微环境中细胞类型及空间交互对弥漫大B细胞淋巴瘤预后的影响。通过多色免疫荧光分析99例未经治疗的DLBCL样本，鉴定出17种细胞表型及10种复现性细胞邻里（RCNs），发现免疫贫乏区域与CD8+ T细胞富集区域的空间邻近性显著改善患者无进展生存期，而PD-L1+ B细胞与CD8+ T细胞富集区域的邻近性则预示不良预后。研究揭示了肿瘤微环境的空间组织与临床结局的关联性。

　　扩散性大B细胞淋巴瘤（DLBCL）是成人中最常见的侵袭性淋巴瘤类型，尽管以蒽环类为基础的免疫化疗在大多数患者中具有治愈潜力，但仍有约30%至40%的患者出现原发性耐药或在随访期间复发。此外，尽管新型免疫疗法如嵌合抗原受体T细胞（CAR-T）或双特异性抗体已出现，仍有约50%的患者因该病死亡。这种患者预后差异的一个关键因素是肿瘤微环境（TME）的复杂性，包括其细胞组成、细胞间相互作用以及空间结构。因此，开发能够改善患者分层的新工具是当前研究的重点。

本研究通过多重免疫荧光（mIF）、细胞表型分析和邻域分析，对来自99名未经治疗的DLBCL患者的样本进行了深入研究，共鉴定出1,218,756个单细胞。我们识别出17种不同的细胞表型和10种复发性细胞邻域（RCN），并据此将DLBCL分为免疫贫乏区域和具有多样免疫细胞浸润的区域。研究发现，B细胞和PD-1阳性的T细胞的缺乏与较少侵袭性的临床特征和较好的生存预后相关。同样，CD8阳性T细胞丰富的区域与免疫贫乏区域的邻近关系也与患者预后较好相关，而PD-L1阳性B细胞丰富的区域和CD8阳性T细胞丰富的区域的邻近关系则与较差的预后相关。这些发现揭示了DLBCL肿瘤微环境中的空间相互作用及其对患者预后的影响，为未来的临床治疗提供了新的视角。

在方法学上，我们使用了mIF技术对组织微阵列（TMA）进行染色，并通过高通量成像和图像处理软件，对细胞进行分割和表型分析。通过对不同细胞类型的相互作用进行统计分析，我们发现了细胞在TME中的组织模式。我们还使用了K-means聚类和潜在狄利克雷分布（LDA）分析，以识别RCN，并进一步研究这些邻域在不同DLBCL亚型中的分布和其与分子、临床病理和生存数据的关系。通过分析细胞间的距离和邻域之间的相互作用，我们发现某些细胞邻域的组合对患者的生存率具有显著影响。

研究结果显示，免疫贫乏的RCN5区域在样本中最为常见，而其他区域如RCN1（富含B细胞和免疫细胞）和RCN9（富含B细胞和T细胞）也占一定比例。这些区域在不同的DLBCL亚型中表现出不同的分布特征，例如，GCB型DLBCL中M1型TAM（抗肿瘤巨噬细胞）丰富的RCN8区域更为常见，而ABC型DLBCL中PD-L1阳性的M2型TAM（促肿瘤巨噬细胞）丰富的RCN10区域更为普遍。此外，我们还发现，HLA-ABC和B2M的表达与某些RCN的组成相关，例如，B2M阳性的DLBCL中，富含B细胞和免疫细胞的RCN1区域比例较低，而HLA-ABC阳性的DLBCL中，CD4阳性T细胞丰富的RCN3和PD-1阳性的细胞丰富的RCN4区域比例较高。同时，HLA-DR阳性的DLBCL中，M2型TAM/非免疫细胞丰富的RCN6区域比例较低，而B细胞丰富的RCN9区域比例较高。

我们还发现，某些RCN的组合对患者预后具有重要影响。例如，CD8阳性T细胞丰富的RCN2与免疫贫乏的RCN5之间的邻近关系与较好的生存率相关，而PD-L1阳性B细胞丰富的RCN7与CD8阳性T细胞丰富的RCN2之间的邻近关系则与较差的生存率相关。此外，PD-L1阳性M2型TAM丰富的RCN10与CD8阳性T细胞丰富的RCN2之间的邻近关系也与较差的生存率相关。这些结果表明，RCN的空间组织在DLBCL的临床表现中具有重要作用。

进一步分析显示，RCN的组成与DLBCL的分子亚型和驱动突变之间存在显著关联。例如，PD-L1阳性M2型TAM丰富的RCN10在EZH2型DLBCL中较少见，而PD-L1阳性B细胞丰富的RCN7则在部分MCD型DLBCL中更为常见。GNA13突变与富含B细胞和免疫细胞的RCN1区域比例较高相关，而PRDM1（BLIMP-1）突变则与缺乏M1型TAM丰富的RCN8区域相关。这些结果提示，不同的驱动突变可能影响TME中细胞的组成和相互作用，从而影响患者的预后。

此外，我们还发现，某些RCN的组织模式与特定的TME亚型和生态类型相关。例如，免疫贫乏的RCN5区域在免疫耗竭型DLBCL中更为常见，而PD-L1阳性B细胞丰富的RCN7和M2型TAM丰富的RCN10区域则在炎症型DLBCL中更为普遍。这些发现表明，DLBCL的TME结构与分子特征之间存在复杂的相互作用，可能影响免疫治疗的疗效。

本研究的结果不仅加深了我们对DLBCL肿瘤微环境的空间组织和细胞间相互作用的理解，还为未来的免疫治疗策略提供了重要的参考。通过识别具有临床意义的RCN，我们可以更好地预测患者的治疗反应，并为个体化治疗提供依据。此外，研究还强调了免疫检查点分子在TME中的重要性，尤其是在T细胞与B细胞之间的相互作用中。这些发现表明，针对特定免疫检查点分子的疗法可能在某些患者群体中表现出更好的疗效，从而为精准医疗提供了新的方向。

总之，本研究通过系统分析DLBCL的肿瘤微环境，揭示了细胞间相互作用和空间组织对患者预后的影响。我们发现，某些RCN的组织模式与较好的生存率相关，而另一些则与较差的预后相关。这些结果不仅有助于理解DLBCL的生物学特性，还为开发更有效的免疫疗法提供了新的思路。未来的研究可以进一步探索这些RCN在不同患者群体中的动态变化，以及它们在疾病复发和进展中的作用，从而为DLBCL的治疗提供更全面的视角。